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細(xì)胞因子范文第1篇

一、細(xì)胞因子與疾病

正常情況下，細(xì)胞因子表達(dá)和分泌受機(jī)體嚴(yán)格的調(diào)控，在病理狀態(tài)下、細(xì)胞因子會(huì)出現(xiàn)異常性表達(dá)，表現(xiàn)為細(xì)胞因子及其受體的缺陷，細(xì)胞因子表達(dá)過高，以及可溶性細(xì)胞因受體的水平增加等。

（一）細(xì)胞因子及其受體的缺陷

包括先天性缺陷和繼發(fā)性缺陷兩種病理情況，例如先天性的性聯(lián)重癥聯(lián)合免疫缺陷病人（XSCID），表現(xiàn)為體液免疫和細(xì)胞免疫的雙重缺陷，出生后必須在無菌罩中生活，往往在幼兒期因感染而夭折?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)這種患者的IL-2受體γ鏈缺陷，由此導(dǎo)致IL-2、IL-4和IL-7的功能障礙，使免疫功能嚴(yán)重受損。細(xì)胞因子的繼發(fā)性缺陷往往發(fā)生在感染、腫瘤等疾病以后，如人類免疫缺陷病毒（HIV）感染并破壞TH后，可導(dǎo)致TH細(xì)胞產(chǎn)生的各種細(xì)胞因子缺陷，免疫功能全面下降，從而表現(xiàn)出獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS）的一系列癥狀。

（二）細(xì)胞因子表達(dá)過高

在炎癥、自身免疫病、變態(tài)反應(yīng)、休克等疾病時(shí)，某些細(xì)胞因子的表達(dá)量可成百上千倍地增加，例如為風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的滑膜液中可發(fā)現(xiàn)IL-1、IL-6、IL-8水平明顯高于正常人，而這些細(xì)胞因子均可促進(jìn)炎癥過程，使病情加重。細(xì)胞因子的抑制劑有可能這為類癥性細(xì)胞因子水平升高的疾病。

（三）可溶性細(xì)胞因子受體水平升高

細(xì)胞膜表面的細(xì)胞因子受體可脫落下來，成為可溶性細(xì)胞因子受體，存在于體液和血清中，在某些疾病條件下，可出現(xiàn)可溶性細(xì)胞因子受體的水平升高。這類分子可能結(jié)合細(xì)胞因子，使其不再與膜表面的細(xì)胞因子受體結(jié)合，因而封閉了細(xì)胞因子的功能。

二、細(xì)胞因子與治療

，利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的重組細(xì)胞因子做為生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑（BRM）治療腫瘤、造血障礙、感染等已收到良好的療效，成為新一代的藥物。重組細(xì)胞因子做為藥物具有很多優(yōu)越之處。例如細(xì)胞因子為人體自身成分，可調(diào)節(jié)機(jī)體的生理過程和提高免疫功能，很低劑量即可發(fā)揮作用，因而療效顯著，副作用小，是一種全新的生物制劑，已成為某些疑難病癥不可缺少的治療手段。目前已批準(zhǔn)生產(chǎn)的細(xì)胞因子藥物包括干擾素α、β、γ，Epo，GM-CSF，G-CSF，IL-2，正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)的包括IL-1、3、4、6、11，M-CSF，SCF，TGF-β等（表4-3、4-4。）這些細(xì)胞因子的主要適應(yīng)癥包括腫瘤、感染（如肝炎、AIDS）、造血功能障礙、創(chuàng)傷、炎癥等。表4-3已批準(zhǔn)生產(chǎn)的細(xì)胞因子多肽藥物（略）表4-4已批準(zhǔn)臨床試驗(yàn)的細(xì)胞因子多肽藥物（略）

細(xì)胞因子療法（cytokinetherapy）基本上可分為兩種，即細(xì)胞因子補(bǔ)充和添加療法及細(xì)胞因子阻斷和拮抗療法。

（一）細(xì)胞因子補(bǔ)充和添加療法

通過各種途徑使患者體內(nèi)細(xì)胞因子水平增加，充分發(fā)揮細(xì)胞因子的生物學(xué)作用，從而抗御和治療疾病。目前已有多種細(xì)胞因子（多為基因重組產(chǎn)品）試用于臨床治療，經(jīng)大量臨床資料驗(yàn)證，以下幾種細(xì)胞因子的臨床適應(yīng)癥比較明確，臨床療效比較肯定。

1．IFN不同型別的IFN各有其獨(dú)特的性質(zhì)和生物學(xué)活性，其臨床應(yīng)用適應(yīng)癥和療效有所不同。IFN-α主要用于治療病毒性感染和腫瘤。IFN-α對于病毒性肝炎（主要是慢性活動(dòng)性肝炎）、皰疹性角膜炎、帶狀皰疹、慢性宮頸炎等有較好療效。IFN-α對于血液系統(tǒng)惡性疾病如毛細(xì)胞白血病（有效率達(dá)80%以上）等療效較顯著，但對實(shí)體腫瘤的療效較差。雖然IFN-γ的免疫調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于IFN-α，但其治療腫瘤的效果弱于IFN-α，目前有人應(yīng)用IFN-γ治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、慢性肉芽腫取得了一定療效。

2．IL-2目前多將IL-2與LAD/TIL合用治療實(shí)體腫瘤，對腎細(xì)胞癌、黑色素瘤、非何杰金淋巴瘤、結(jié)腸直腸癌有較顯著的療效，應(yīng)用IL-2（或與IFN合用）治療感染疾病亦取得了一定療效。

3．TNf由于其全身應(yīng)用副作用嚴(yán)重且療效差，目前多傾向?qū)⑵渚植繎?yīng)用如瘤灶內(nèi)注射治療某些腫瘤和直腸癌，其確切療效尚待進(jìn)一步評價(jià)。

4．CSF目前主要應(yīng)用GM-CSF和G-CSF治療各種粒細(xì)胞低下患者。例如與化療藥物合用治療腫瘤可以降低化療后粒細(xì)胞減少程度，使粒細(xì)胞的數(shù)量和功能能盡快回升并能提高機(jī)體對化療藥物的耐受劑量，從而提高治療腫瘤的效果。對再生障礙性貧血和AIDS亦有肯定療效。用于骨髓移植后可使中性粒細(xì)胞盡快恢復(fù)，降低感染率。此外，應(yīng)用EPO治療腎性貧血取得了非常顯著的療效。

（二）細(xì)胞因子阻斷和拮抗療法

其基本原理是抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生和阻斷細(xì)胞因子與其相應(yīng)受體的結(jié)合及受體后信號(hào)傳導(dǎo)過程，使細(xì)胞因子的病理性作用難以發(fā)揮。該療法適用于自身免疫性病、移植排序反應(yīng)、感染性休克等的。例如抗TNF單克隆抗體可以減輕甚至阻斷感染性休克的發(fā)生，IL-1受體拮抗劑對于炎癥、自身免疫性疾病等具有較好的治療效果。

三、細(xì)胞因子的檢測

細(xì)胞因子檢測是判斷機(jī)體免疫功能的一個(gè)重要指標(biāo)，因而具有重要的實(shí)驗(yàn)室價(jià)值，同時(shí)還可能在臨床上有諸多實(shí)用價(jià)值、包括許多疾病的診斷、病程觀察、療效判斷及細(xì)胞因子治療監(jiān)測等。但是，由于細(xì)胞因子在體內(nèi)的含量甚微，給細(xì)胞因子的檢測帶來困維。細(xì)胞因子的主要檢測包括：

（一）依賴性細(xì)胞株

一些腫瘤細(xì)胞株必須依賴于細(xì)胞因子方能在體外增殖，如DTLL細(xì)胞株依賴IL-2；FDC-PL細(xì)胞株依賴于小鼠IL-3；TF-1細(xì)胞株依賴于人IL-3和人GM-CSF，因而可利用這些依賴細(xì)胞株檢測相應(yīng)的細(xì)胞因子。這種方法敏感性高，特異性也不錯(cuò)，但可異的是并非所有細(xì)胞因都能找到相應(yīng)的細(xì)胞株，因而限制了它的。

（二）功能檢測

利用一些細(xì)胞因子的功能特性，可建立相應(yīng)的活性測定方法，如干擾素的抑制病毒感染效應(yīng)，腫瘤壞死因子對L929細(xì)胞的殺傷作用等。這樣的方法敏感性高，但特異性不夠，容易受一些擾因素的。

（三）免疫測定

利用抗原抗體反應(yīng)的原理，制備出抗細(xì)胞因子的單克隆抗體或多克隆抗體，可進(jìn)行細(xì)胞因子的免疫檢測。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、操作簡便，缺點(diǎn)是靈敏度不夠，且不能代表活性測定的結(jié)果。從目前的國際趨勢來看，已研制出了高靈敏度、特異性高、高度配套的細(xì)胞檢測試劑盒，其應(yīng)用范圍正在擴(kuò)大，有良好的發(fā)展前景。

（四）功能測定與抗體抑制

為解決功能定特異性不夠，免疫測定靈敏度不夠的，可將兩種方法結(jié)合起來，利用各自的長處，有可能得到較為可靠的結(jié)果。在這一方法中，所用的抗細(xì)胞因子抗體必須是具有中和活性的抗體。

（五）分子雜交技術(shù)

利用分子生物學(xué)技術(shù)，制備出細(xì)胞因子的基因探針，可通過分子雜交技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)，這是一種高度敏感和高度特異的檢測技術(shù)，目前在實(shí)驗(yàn)室研究中使用較廣，其缺點(diǎn)是操作較為繁瑣，測定結(jié)果只能代表細(xì)胞因子基因的表達(dá)，而不能代表活性細(xì)胞因子的水平。

細(xì)胞因子范文第2篇

【關(guān)鍵詞】 干細(xì)胞因子； 卵泡； 卵母細(xì)胞； 子宮內(nèi)膜； 生殖醫(yī)學(xué)

1 干細(xì)胞因子在卵泡發(fā)育中的作用

1.1 干細(xì)胞因子是酪氨酸激酶受體的配體，具有促進(jìn)細(xì)胞增值和分化的作用

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，干細(xì)胞因子能夠促進(jìn)卵泡發(fā)育，對優(yōu)勢卵泡生長有積極的影響。發(fā)育卵泡的顆粒細(xì)胞產(chǎn)生的干細(xì)胞因子對顆粒細(xì)胞-卵泡膜細(xì)胞相互作用很重要，并能促進(jìn)卵母細(xì)胞發(fā)育。干細(xì)胞因子也能直接作用于卵泡膜細(xì)胞以促進(jìn)細(xì)胞的生長和分化。干細(xì)胞因子促進(jìn)卵泡膜細(xì)胞生長并刺激其分泌多種生長因子,使卵泡膜和顆粒細(xì)胞之間形成正反饋鏈。應(yīng)用RT-PCR實(shí)驗(yàn)分析顯示，牛的顆粒細(xì)胞表達(dá)干細(xì)胞因子，卵泡膜細(xì)胞表達(dá)受體酪氨酸蛋白激酶受體,酪氨酸蛋白激酶和干細(xì)胞因子對在體外維持卵母細(xì)胞存活與發(fā)育起重要作用,酪氨酸蛋白激酶/干細(xì)胞因子相互作用對于卵泡竇形成和類固醇激素生成很重要，調(diào)整卵母細(xì)胞的存活和細(xì)胞質(zhì)成熟I代分離牛卵泡膜內(nèi)層細(xì)胞，培養(yǎng)在游離血清中，當(dāng)細(xì)胞在次融合狀態(tài)下以劑量依賴的方式來研究干細(xì)胞因子刺激卵泡膜細(xì)胞生長的活動(dòng)方式，發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞因子能刺激卵泡膜細(xì)胞分泌雄甾烯二酮產(chǎn)生。表明在卵泡發(fā)育中干細(xì)胞因子能夠直接刺激卵泡膜細(xì)胞生長和類固醇激素的產(chǎn)生。通過測定小、中、大卵泡的全部RNA，發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞因子mRNA的穩(wěn)定狀態(tài)水平在大卵泡的顆粒細(xì)胞中最高，在小卵泡中最低，在中等卵泡中居中。而酪氨酸蛋白激酶mRNA穩(wěn)定狀態(tài)水平在大小不同卵泡中沒有差別。干細(xì)胞因子在大卵泡中的高表達(dá)提示干細(xì)胞因子對提高大卵泡、優(yōu)勢卵泡的生長和類固醇激素產(chǎn)生可能很重要。在大的竇前卵泡中C-干細(xì)胞因子相互作用調(diào)節(jié)卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)成熟和卵泡膜細(xì)胞產(chǎn)生雄激素的量達(dá)到最大。干細(xì)胞因子還可能參與產(chǎn)生類固醇細(xì)胞之間的信息傳遞，干細(xì)胞因子作為顆粒細(xì)胞第一起源的生長因子，能夠在促性腺激素的存在下直接刺激卵泡膜細(xì)胞生長和雄甾烯二酮的產(chǎn)生，然而，其對卵泡膜細(xì)胞孕酮(P)產(chǎn)生在任何密度下均無顯著影響。干細(xì)胞因子顯著改變卵泡膜細(xì)胞功能，并且支持局部顆粒―卵泡膜細(xì)胞相互作用，因而在卵巢局部調(diào)節(jié)中具有重要作用。干細(xì)胞因子不僅是卵泡膜細(xì)胞功能的重要調(diào)節(jié)因子，且還能調(diào)節(jié)局部間質(zhì)―上皮細(xì)胞的相互作用。牛的卵巢顆粒細(xì)胞可表達(dá)干細(xì)胞因子基因，而且牛顆粒細(xì)胞主要表達(dá)可溶性干細(xì)胞因子，而不是膜性干細(xì)胞因子。牛的大、中、小卵泡膜細(xì)胞和間質(zhì)―上皮細(xì)胞一樣可表達(dá)酪氨酸蛋白激酶受體。已證明酪氨酸蛋白激酶mRNA在提純的膜細(xì)胞上表達(dá)，小、中、大卵泡均表達(dá)干細(xì)胞因子和酪氨酸蛋白激酶mRNA，表明干細(xì)胞因子和酪氨酸蛋白激酶基因表達(dá)貫穿于卵泡的發(fā)育過程中。干細(xì)胞因子刺激卵泡膜細(xì)胞生長對于卵泡內(nèi)/外層卵泡膜的形成很重要，來源于顆粒細(xì)胞的干細(xì)胞因子可能對未分化的間質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為卵泡膜細(xì)胞募集在早期卵泡周圍有作用，因?yàn)樵诮M織培養(yǎng)中干細(xì)胞因子顯著增加早期卵泡周圍卵泡膜細(xì)胞層數(shù)目，有利于卵泡健康發(fā)育。如果卵泡膜細(xì)胞層分解將導(dǎo)致卵泡發(fā)育異常。干細(xì)胞因子可刺激融合培養(yǎng)狀態(tài)下牛卵泡膜細(xì)胞產(chǎn)生雄甾烯二酮,干細(xì)胞因子直接刺激雄甾烯二酮產(chǎn)生而不是P產(chǎn)生，提示干細(xì)胞因子可能刺激卵泡期而非黃體期卵泡膜細(xì)胞的分化狀態(tài)。在正常卵泡發(fā)育中，較大卵泡不斷產(chǎn)生類固醇激素，發(fā)育為優(yōu)勢卵泡，并被選擇排卵,干細(xì)胞因子mRNA在大卵泡的顆粒細(xì)胞中最高，提示干細(xì)胞因子對增加的卵泡膜細(xì)胞類固醇激素產(chǎn)量及優(yōu)勢卵泡的選擇很重要。在卵泡發(fā)育過程中非正常的干細(xì)胞因子表達(dá)可以明顯改變卵泡功能。干細(xì)胞因子過分表達(dá)可致發(fā)育卵泡數(shù)目增多和雄激素水平增高，最終導(dǎo)致多囊卵巢綜合征。而低水平的干細(xì)胞因子可能影響優(yōu)勢卵泡選擇或卵泡終末階段發(fā)育。顆粒細(xì)胞產(chǎn)生的干細(xì)胞因子在卵泡膜細(xì)胞生長和雄甾烯二酮產(chǎn)生中的作用提供一種反饋機(jī)制，其可能調(diào)節(jié)卵巢內(nèi)間質(zhì)一上皮細(xì)胞的相互作用。這些細(xì)胞一細(xì)胞相互作用對正常卵巢卵泡發(fā)育和生殖功能必不可少。

1.2 干細(xì)胞因子對體外受精-胚胎移植的影響

干細(xì)胞因子是由顆粒細(xì)胞產(chǎn)生并且其水平受促卵泡成熟激素調(diào)節(jié)，提示干細(xì)胞因子在人卵泡發(fā)育過程中很重要。干細(xì)胞因子的表達(dá)與卵母細(xì)胞質(zhì)量或人卵泡發(fā)育是否有關(guān)仍不清楚。衡量卵母細(xì)胞質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)是卵母細(xì)胞的受精能力，卵母細(xì)胞和受精后胚胎發(fā)育結(jié)果是決定受精卵是否能成功植人在宮內(nèi)的因素。干細(xì)胞因子在胚胎移植后獲得成功，妊娠患者的卵泡液中的濃度高于未妊娠者，提示干細(xì)胞因子可能是調(diào)節(jié)人類卵母細(xì)胞生長或卵泡發(fā)育過程中的一個(gè)重要因子，來源于子宮內(nèi)膜細(xì)胞的干細(xì)胞因子，以自分泌/旁分泌方式，在胚胎移植過程中，通過受體酪氨酸蛋白激酶刺激胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞生長，在接受體外受精-胚胎移植的妊娠者的卵泡液中，干細(xì)胞因子濃度高于未妊娠者。干細(xì)胞因子對卵泡發(fā)育有著顯著的誘導(dǎo)作用。干細(xì)胞因子是參與原始卵泡發(fā)育的啟動(dòng)因子。干細(xì)胞因子對優(yōu)勢原始卵泡發(fā)育和啟動(dòng)原始卵泡增值是必要的[3]。發(fā)育卵泡的顆粒細(xì)胞產(chǎn)生的干細(xì)胞因子對顆粒細(xì)胞-卵泡膜細(xì)胞相互作用很重要，并能促進(jìn)卵母細(xì)胞發(fā)育[4，5，6]。干細(xì)胞因子也能直接作用于卵泡膜細(xì)胞以促進(jìn)細(xì)胞的生長和分化[7]。卵泡液中較高濃度干細(xì)胞因子，表明干細(xì)胞因子與卵泡生長發(fā)育相關(guān)。總之，卵巢組織可產(chǎn)生干細(xì)胞因子，并通過自分泌和旁分泌等方式參與卵泡發(fā)育的過程，誘導(dǎo)、促進(jìn)卵泡發(fā)育，刺激卵泡受體甾體激素產(chǎn)生，提高卵子的質(zhì)量，從而提高體外受精-胚胎移植的妊娠率。表明干細(xì)胞因子是卵巢功能局部調(diào)節(jié)因子之一。對它的進(jìn)一步深入研究，有助于不孕癥的治療。

1.3 干細(xì)胞因子水平對卵母細(xì)胞發(fā)育、受精和卵裂的影響

卵泡也是卵母細(xì)胞生長發(fā)育的微環(huán)境，其中含有許多對卵母細(xì)胞發(fā)育有重要影響的生物活性因子和激素，主要由血漿滲透液及卵巢局部產(chǎn)生的物質(zhì)組成，其中含有許多對卵母細(xì)胞生長發(fā)育及受精卵發(fā)育潛能有重要影響的生物活性因子和激素[8，9，10]。發(fā)育成熟的卵母細(xì)胞是卵子受精的前提條件，而優(yōu)質(zhì)胚胎又是體外受精-胚胎移植成功的關(guān)鍵。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，干細(xì)胞因子對誘導(dǎo)原始卵泡發(fā)育、促進(jìn)卵泡膜細(xì)胞增殖、竇狀卵泡類固醇激素生成及卵母細(xì)胞發(fā)育具有積極的促進(jìn)作[11，12，13]。趙海波等通過卵泡液干細(xì)胞因子水平對卵母細(xì)胞發(fā)育、受精和卵裂影響的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，成熟卵母細(xì)胞的卵泡液干細(xì)胞因子水平明顯高于未成熟者，說明卵巢自身產(chǎn)生的干細(xì)胞因子通過旁分泌和/或自分泌的方式，促進(jìn)卵母細(xì)胞的生長發(fā)育[14]。卵母細(xì)胞發(fā)育的好與壞，直接影響其今后的受精及分裂過程。SMIKLE[15]等研究發(fā)現(xiàn)，在體外受精―胚胎移植者中，妊娠組卵泡液干細(xì)胞因子水平顯著高于未妊娠組。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，受精卵子的卵泡液干細(xì)胞因子水平明顯高于未受精卵子，優(yōu)質(zhì)胚胎的卵泡液干細(xì)胞因子水平明顯高于劣質(zhì)胚胎。所以，卵泡液中干細(xì)胞因子水平也間接影響著卵子的受精率和胚胎質(zhì)量，較高水平的干細(xì)胞因子有利于卵子的受精和優(yōu)質(zhì)胚胎的形成。

2 干細(xì)胞因子在促超排卵中的關(guān)系

保證良好的促超排卵效果，是體外受精-胚胎移植工作成功的首要一步，如果卵巢反應(yīng)差可能因得不到足夠數(shù)目的成熟卵子，影響臨床妊娠率。足夠發(fā)育的大卵泡是得到成熟卵子的前提，對如何提高促超排卵周期中卵泡發(fā)育的質(zhì)量至關(guān)重要。 促超排卵中干細(xì)胞因子 與促卵泡激素 之間的相互作用，17位作者通過實(shí)驗(yàn)表明，患者在用藥前的個(gè)人情況大多相似，血清中干細(xì)胞因子、促卵泡激素和黃體生成素水平在各反應(yīng)組之間沒有差異，而卵泡液中干細(xì)胞因子、促卵泡激素和黃體生成素水平在高、中反應(yīng)組中顯著高于低反應(yīng)組，說明卵巢對促排卵藥物的反應(yīng)差異并不在于血清干細(xì)胞因子濃度的高低，而主要在于卵泡自身。通過測定小、中、大卵泡的全部RNA，發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞因子mRNA 的穩(wěn)定狀態(tài)水平在大卵泡顆粒細(xì)胞內(nèi)最高，在小卵泡中最低，在中等卵泡中居中［16］；高、中反應(yīng)組中大卵泡數(shù)目多，產(chǎn)生的顆粒細(xì)胞和卵泡膜細(xì)胞數(shù)也多，人卵巢內(nèi)顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞都能夠產(chǎn)生干細(xì)胞因子［17，18，19］；這種在大卵泡中的高表達(dá)提示干細(xì)胞因子對提高大卵泡、優(yōu)勢卵泡的生長很重要。低反應(yīng)組中大卵泡數(shù)目少，產(chǎn)生干細(xì)胞因子也少，以及需要促卵泡激素的水平刺激作用不及高、中反應(yīng)組。促卵泡激素促使卵泡進(jìn)一步發(fā)育，提供了產(chǎn)生干細(xì)胞因子的物質(zhì)基礎(chǔ)，反過來，干細(xì)胞因子又能夠維持和調(diào)整卵泡發(fā)育，促進(jìn)卵母細(xì)胞成熟。促卵泡激素促進(jìn)卵巢多個(gè)卵泡生長發(fā)育的活動(dòng)，受到卵巢內(nèi)微環(huán)境的內(nèi)分泌和旁分泌因子的調(diào)整，使卵巢內(nèi)各種類型細(xì)胞之間相互作用，這些協(xié)同作用可以影響卵泡的發(fā)育、卵子成熟與排卵。近年來動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究認(rèn)為［19，20］，干細(xì)胞因子和促卵泡激素之間的作用對動(dòng)物卵泡生長發(fā)育有重要影響；干細(xì)胞因子和促卵泡激素之間相互調(diào)節(jié)、相互影響，彼此有促進(jìn)作用。

3 干細(xì)胞因子與子宮內(nèi)膜的關(guān)系

飼養(yǎng)層細(xì)胞在分離培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞過程中起著非常重要的作用，它能夠分泌一些生長因子，如干細(xì)胞因子、白血病抑制因子，這些因子可以有效的抑制胚胎干細(xì)胞的分化并促進(jìn)使其增值。曲文玉等用人子宮內(nèi)膜成纖維細(xì)胞作為飼養(yǎng)層，使人胚胎干細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)14代仍保持胚胎干細(xì)胞的所有特性，且子宮內(nèi)膜傳至20代仍增值旺盛。在人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞飼養(yǎng)層上生長的胚胎干細(xì)胞持續(xù)培養(yǎng)后，仍具有胚胎干細(xì)胞的特性，不影響他們顯著的發(fā)育潛能，維持正常的核型。子宮內(nèi)膜細(xì)胞可作為體外培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞的飼養(yǎng)層細(xì)胞，為將來臨床應(yīng)用提供安全保障。

總之，干細(xì)胞因子與生殖醫(yī)學(xué)密不可分，它的進(jìn)一步研究和發(fā)展，為臨床治療不孕癥和提高體外受精-胚胎移植成功率奠定基礎(chǔ)。

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細(xì)胞因子范文第3篇

1轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)

TGF-β是一組多功能蛋白多肽,廣泛存在于動(dòng)物正常組織細(xì)胞及轉(zhuǎn)化細(xì)胞中,以骨組織和血小板中含量最為豐富,其在骨形成和骨重建中起著極其重要的作用。TGF-βs能促進(jìn)成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞及前成骨細(xì)胞的增殖,同時(shí)能有效促進(jìn)膠原合成及非膠原細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的表達(dá);此外,TGF-βs能通過抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的合成和促進(jìn)金屬蛋白酶組織抑制因子TIMP-1的合成抑制細(xì)胞外基質(zhì)分子的降解[2]。

目前,對DO過程中TGF-β1的表達(dá)研究較為深入,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為TGF-β1在DO的整個(gè)過程中均有表達(dá),只是表達(dá)水平不同;并且在不同時(shí)期表達(dá)部位也不同。Mehrara等[3]在鼠下頜DO實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),在潛伏期末TGF-β1表達(dá)較未手術(shù)組增加2.5倍,牽張初期增加到正常水平的3倍,并且在整個(gè)牽張期都保持高水平,直至固定期第4周末才恢復(fù)到正常水平;潛伏期及牽張?jiān)缙赥GF-β1主要在截骨線周圍的炎癥細(xì)胞、成骨細(xì)胞、間充質(zhì)細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)中表達(dá)增高;當(dāng)繼續(xù)牽引,則高表達(dá)于活性成骨細(xì)胞、新生成的血管及細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原纖維;固定期TGF-β1表達(dá)僅局限于牽張間隙中的成骨細(xì)胞。Steinbrech等[4]發(fā)現(xiàn)TGF-β1隨牽張的進(jìn)行而持續(xù)表達(dá),并伴有骨基質(zhì)的輕度礦化和膠原的活躍合成,而且TGF-β1及其受體的表達(dá)廣泛存在于皮質(zhì)切開的骨邊緣、骨膜、周圍軟組織和炎細(xì)胞,以及中央纖維形成區(qū)的成纖維細(xì)胞和各區(qū)域的成骨細(xì)胞。陳勇等[5]也證實(shí)TGF-β1的表達(dá)貫穿下頜骨DO的全過程,且TGF-β1mRNA及其蛋白表達(dá)在牽引早期達(dá)到高峰,此后逐漸減弱,其不同時(shí)期表達(dá)部位與上述相似。表明牽張機(jī)械力刺激可促進(jìn)TGF-β1的合成和分泌,推測其在牽引成骨中是成骨細(xì)胞遷移、分化、胞外基質(zhì)合成、血管形成的重要調(diào)節(jié)因子。

然而,外源性TGF-β1對DO中新骨形成作用的研究結(jié)果不完全相同。Ozkan等[6]發(fā)現(xiàn)外源性TGF-β1增加牽張區(qū)新生骨組織的密度和強(qiáng)度;而Rauch等[7]在兔DO實(shí)驗(yàn)中局部應(yīng)用TGF-β1,結(jié)果對成骨量及成骨密度均無影響,僅增加了骨痂區(qū)的纖維組織。Seiadini等[8]在對脛骨節(jié)段性DO研究中,給予外源性重組人TGF-β,結(jié)果發(fā)現(xiàn)空白對照組和生理鹽水組骨明顯、連續(xù)、穩(wěn)定、礦化均勻,而注入TGF-β組結(jié)果則相反,且隨劑量的增加軟骨和軟骨細(xì)胞數(shù)量減少,表現(xiàn)出對成骨起抑制作用。表明TGF-βs促進(jìn)成骨作用在體內(nèi)可能存在一精確的調(diào)節(jié)機(jī)制,如何利用外源性TGF-βs來促進(jìn)DO中的骨組織的再生有待進(jìn)一步研究。

2骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)

BMPs是一種疏水酸性糖蛋白,為TGF-β超家族成員之一,目前已發(fā)現(xiàn)的有BMPl-12,其作用具有濃度依賴性,低濃度時(shí)能促進(jìn)細(xì)胞趨化和增殖,高濃度時(shí)能促進(jìn)細(xì)胞分化和骨形成。Sato等[9]在鼠長骨DO實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),在截骨后4天,BMP-2、-4mRNA可在骨膜下未成熟骨痂中的軟骨前體細(xì)胞中檢測到;截骨后7天,BMP-2、-4mRNA恢復(fù)到術(shù)前水平;當(dāng)牽引開始后,BMP-2、-4mRNA在纖維區(qū)的軟骨細(xì)胞,骨細(xì)胞和它們的前體細(xì)胞中明顯表達(dá),約是骨切開時(shí)表達(dá)量的20倍,在整個(gè)牽引期維持較高水平;至固定期BMP-2、-4表達(dá)消失;而BMP-6、-7在DO中的表達(dá)情況與BMP-2、-4的表達(dá)不同,牽張初期,BMP-6僅在成軟骨細(xì)胞內(nèi)可以檢測得到,隨著牽張的進(jìn)行,BMP-6 mRNA表達(dá)漸降低,至固定期不表達(dá);BMP-7在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中均未被檢測到。推測BMP-6在軟骨成骨階段可能發(fā)揮著一定的作用,BMP-7對其成骨無明顯影響。Rauch等[10]在對兔脛骨施行牽引成骨術(shù)時(shí)也證實(shí),在潛伏期,BMP-2、-4表達(dá)增加,尤其在骨膜的間充質(zhì)細(xì)胞和成骨細(xì)胞十分明顯;在牽引期,BMP-2、-4在成纖維細(xì)胞和軟骨細(xì)胞中表達(dá)持續(xù)升高;當(dāng)牽引停止后,表達(dá)逐漸下降;但Rauch等發(fā)現(xiàn)BMP-7的表達(dá)與BMP-2、-4的表達(dá)同步,且表達(dá)的部位也基本類似。這可能與動(dòng)物模型的建立、檢測手段和檢測試劑等因素有關(guān)。Khanal[11]進(jìn)行牽引區(qū)新生骨組織免疫組化檢查發(fā)現(xiàn),潛伏期BMP-2、-4, Smads 1、5、 8的表達(dá)僅輕微增加,牽引期表達(dá)顯著增加而進(jìn)入固定期則逐漸減弱,認(rèn)為BMP信號(hào)通路在將機(jī)械應(yīng)力轉(zhuǎn)錄為生物學(xué)效果中起重要作用。

目前,已證實(shí)BMP-2、BMP-4、BMP-6、BMP-7、BMP-9、BMP-12均有促進(jìn)新骨形成的作用,其中,以BMP-2促進(jìn)新骨形成作用最強(qiáng)[12-18]。這些骨形態(tài)發(fā)生蛋白之間也可能存在協(xié)同作用,有文獻(xiàn)報(bào)道[19-20]重組BMP-2與BMP-7的聯(lián)合基因治療較單一應(yīng)用其中一個(gè)更能促進(jìn)成骨細(xì)胞分化成骨。但目前仍然不知道在牽引過程中產(chǎn)生的機(jī)械應(yīng)力是如何激活機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)生物學(xué)信號(hào),尚需進(jìn)一步研究。

3血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)

血管內(nèi)皮生長因子也稱血管滲透因子(vascular permeability factor,VPF),最初是在腫瘤細(xì)胞分泌物中發(fā)現(xiàn)的,是一種糖基化分泌性多肽因子,具有維持血管正常狀態(tài)和完整性,增加血管通透性,誘導(dǎo)血管發(fā)生,并促進(jìn)血管生成的作用。Warren等[21]在鼠下頜骨DO實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),在截骨后5～7天 VEGFmRNA的表達(dá)增加,在牽引1周左右達(dá)高峰,其表達(dá)貫穿整個(gè)牽引期及固定期,在牽引帶成骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞上有高濃度的VEGF表達(dá)及強(qiáng)烈的血管生成反應(yīng)。Byun[22]在狗單側(cè)下頜骨DO過程中檢測牽引區(qū)VEGF和其兩種受體Flt-1、Flk-1,發(fā)現(xiàn)牽引7天后牽引區(qū)成骨細(xì)胞、骨細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中VEGF和其受體表達(dá)明顯增加,并在成骨細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中維持14天。牽引28天后VEGF和VEGFR-1在成骨細(xì)胞中表達(dá)減弱,牽引區(qū)細(xì)胞中無VEGFR-2表達(dá)。在整個(gè)觀察期VEGFR-1明顯強(qiáng)于VEGFR-2的表達(dá)。Sojo[23]研究發(fā)現(xiàn)VEGF在牽引區(qū)新生成骨的前部靠近新生成骨的周邊的成骨細(xì)胞表達(dá),而BMP-2、-4在肥大的軟骨細(xì)胞中表達(dá)。在同一標(biāo)本中VEGF表達(dá)區(qū)域比BMP-2、-4表達(dá)區(qū)域離骨干遠(yuǎn),因此認(rèn)為在成骨之前先有血管生成。Casap[24]在兔下頜骨牽引一側(cè)牽引區(qū)應(yīng)用VEGF后發(fā)現(xiàn)應(yīng)用VEGF部位的新骨生成明顯增加,因此,認(rèn)為VEGF對新骨形成具有積極的作用。但Eckardt等[25]在對兔牽引動(dòng)物模型中局部導(dǎo)入VEGF或VEGF拮抗劑,結(jié)果未發(fā)現(xiàn)對新骨形成有明顯影響。推測可能是因?yàn)闄C(jī)械牽張已刺激VEGF等生長因子的大量產(chǎn)生,導(dǎo)入的外源性VEGF或VEGF拮抗劑不足以發(fā)揮作用。另外,導(dǎo)入VEGF的時(shí)機(jī)、劑量及處理方式等都可能影響新骨形成。

4堿性成纖維細(xì)胞生長因子 (basic fibroblast growth factor,bFGF)

bFGF是一種25kD的多肽,包括至少19個(gè)密切相關(guān)的單肽,能促進(jìn)細(xì)胞增殖,調(diào)節(jié)細(xì)胞分化,誘導(dǎo)軟骨和骨基質(zhì)合成,與血管內(nèi)皮生長因子協(xié)同作用,可促進(jìn)血管再生,從而促進(jìn)骨生成。Yeung等[26]研究bFGF在牽引過程中的表達(dá)中發(fā)現(xiàn),在延遲期、牽引期、固定期bFGF均有不同程度的表達(dá)。在潛伏期,骨膜和骨髓質(zhì)區(qū)的類纖維原細(xì)胞bFGF表達(dá)較明顯,新形成的成骨細(xì)胞也有bFGF的表達(dá);牽引期,正在形成中的骨小梁成骨細(xì)胞bFGF有非常強(qiáng)的表達(dá)。在新形成骨小梁和纖維組織中,成骨細(xì)胞密度比相鄰區(qū)域明顯增高,bFGF的表達(dá)也更明顯。在固定期bFGF的表達(dá)比牽引期明顯減弱。劉人愷等[27]在山羊顱骨縫DO實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)山羊顱骨縫在受到牽張力作用后bFGF有高水平表達(dá),以牽張結(jié)束當(dāng)天與第2周最為顯著,主要定位于成纖維樣細(xì)胞與成骨細(xì)胞,隨著固定時(shí)間的延長其表達(dá)逐漸減弱。

應(yīng)用外源性bFGF可刺激骨痂形成,促進(jìn)骨折修復(fù)和再生、移植骨愈合及骨缺損修復(fù)。Okazaki等[28]對兔脛骨行牽引成骨,牽引結(jié)束后,局部注入200μg bFGF,發(fā)現(xiàn)能促進(jìn)牽引區(qū)骨形成。在牽引結(jié)束后2～5周,發(fā)現(xiàn)骨礦化量明顯增加,提示在骨牽引的固定期,外源性bFGF的應(yīng)用可以縮短骨延長時(shí)間。將bFGF注入兔脛骨近端骺板后,血管由鄰近干骺端長入,加速骨前體細(xì)胞的侵入及軟骨骨化。朱永云等[29]將外源性bFGF注射到兔下頜骨牽引區(qū),顯示牽引區(qū)新骨生成速度和數(shù)量高于對照組,認(rèn)為局部導(dǎo)入外源性bFGF可能有促進(jìn)下頜骨牽引成骨的作用,從而為縮短DO療程和減少牽引后復(fù)發(fā)回彈提供了一種可能的途徑。

5胰島素樣生長因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)

胰島素樣生長因子是一類對機(jī)體生長發(fā)育起重要調(diào)節(jié)作用并具有胰島素樣代謝效應(yīng)的因子,目前已發(fā)現(xiàn)有IGF-1和IGF-2兩種異構(gòu)體,分別為含有70個(gè)和67個(gè)氨基酸的單鏈多肽。IGF-1可由成骨細(xì)胞產(chǎn)生并以自分泌方式刺激成骨細(xì)胞增殖和基質(zhì)合成,IGF-2的生理作用與IGF-1相似但作用較弱。Eingartner等[30]研究發(fā)現(xiàn),在DO過程中IGF-l的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的時(shí)間性。在牽引早期,血漿中IGF-1水平最先升高,其后牽引帶和周圍骨組織中IGF-1水平開始升高,這可能是由于受牽引力影響,周圍軟組織最先釋放IGF-1,導(dǎo)致血液中濃度升高的結(jié)果。而Meyer等[31]檢測牽引成骨時(shí)兔血清IGF-1含量發(fā)現(xiàn),在骨切開后IGF-1血清濃度下降,但牽引期其濃度并無明顯升高。Yates等[32]研究IGF-1在豬下頜DO早期的作用,發(fā)現(xiàn)牽引早期骨膜中IGF-1升高明顯,牽引帶僅有少量礦化骨質(zhì)形成;牽引結(jié)束后,IGF-1恢復(fù)到正常水平,牽引帶有大量礦化骨形成。說明IGF-1可能在牽引早期發(fā)揮重要作用。王志國等[33]在研究局部應(yīng)用IGF-1對兔下頜骨DO的影響時(shí)發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組和對照組動(dòng)物在X線片上無明顯差異;在組織學(xué)觀察上,兩組在牽張間隙內(nèi)均見到有大量新生骨小梁生成,骨小梁排列方向與牽引方向一致;組織學(xué)分級(jí)評價(jià)結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組新骨生成數(shù)量僅比對照組多2.4%,但統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果表明兩組未見顯著差異。Schrnid[34]研究發(fā)現(xiàn)只有在機(jī)體缺乏IGF時(shí),外源性IGF對成骨細(xì)胞的分化與增殖才有促進(jìn)作用。在骨切開術(shù)和隨后的牽引過程中,局部組織會(huì)產(chǎn)生較高濃度的IGF-1,這時(shí)候?qū)胪庠葱訧GF-1顯得多余。另外,聯(lián)合應(yīng)用生長因子可能比單獨(dú)應(yīng)用某一種生長因子更有效。

綜上所述,在牽引成骨術(shù)中牽張機(jī)械力能促進(jìn)多種細(xì)胞因子的表達(dá),其參與了牽引區(qū)新骨形成及礦化的調(diào)節(jié),這為闡明牽引成骨的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ);但這些細(xì)胞因子表達(dá)的時(shí)間順序及之間的相互作用還尚不清楚,此外,對于外源性細(xì)胞因子應(yīng)用的時(shí)間、途徑及劑量還需深入研究。相信隨著對牽引成骨分子機(jī)制的研究深入,必將對臨床應(yīng)用和研究產(chǎn)生重要的指導(dǎo)意義,推動(dòng)牽引成骨的廣泛應(yīng)用。

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細(xì)胞因子范文第4篇

健康網(wǎng)訊: 王紅英 　閆華 劉衛(wèi)紅

【摘要】 輸卵管的微環(huán)境中含有細(xì)胞因子、粘附因子、蛋白質(zhì)等多種物質(zhì)，參與輸卵管生理功能、病理過程的調(diào)節(jié)，作用機(jī)制極其復(fù)雜。認(rèn)識(shí)輸卵管微環(huán)境物質(zhì)的變化，有助于防治輸卵管炎、輸卵管性不孕、輸卵管妊娠等疾病，提高體外受精成功率。

輸卵管是卵子攝取、和卵子最后成熟、受精、植入前胚胎發(fā)育的場所，在人類生殖過程中發(fā)揮著重要的作用。而輸卵管的微環(huán)境是其物質(zhì)基礎(chǔ)，輸卵管病變導(dǎo)致輸卵管微環(huán)境中物質(zhì)變化及功能異常，引起輸卵管性不孕、輸卵管妊娠發(fā)生，嚴(yán)重危害婦女的身心健康;現(xiàn)對輸卵管微環(huán)境中細(xì)胞因子、粘附因子、蛋白質(zhì)的表達(dá)及作用做一綜述。 輸卵管連于子宮角兩側(cè)，細(xì)長而彎曲，由漿膜層、肌層、粘膜層構(gòu)成，其中粘膜層由單層柱狀上皮和固有層組成，單層柱狀上皮包括分泌細(xì)胞、纖毛細(xì)胞和少數(shù)栓細(xì)胞;在近排卵時(shí)，上皮高度和分泌活動(dòng)達(dá)到最高峰;排卵期雌激素水平升高，輸卵管蠕動(dòng)推動(dòng)由子宮角向輸卵管壺腹部移動(dòng)，同時(shí)，峽部粘膜分泌增加，有利于的運(yùn)行，并為提供足夠的能量;排卵后，輸卵管漏斗部拾卵，使之漂浮于輸卵管液中，、卵子在輸卵管壺腹部相遇、受精，受精卵在輸卵管的蠕動(dòng)性收縮、纖毛的擺動(dòng)及輸卵管液的作用下向?qū)m腔運(yùn)行;輸卵管的功能與微環(huán)境的周期調(diào)節(jié)是分不開的，輸卵管液是輸卵管微環(huán)境中最重要的部分，分別來自血漿滲液、輸卵管分泌物、子宮液、卵泡液，含有細(xì)胞因子、生長因子、粘附因子、特異性蛋白質(zhì)、電解質(zhì)、糖、氨基酸、多種酶等多種物質(zhì)。輸卵管上皮細(xì)胞表達(dá):雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR），其功能是在雌孕激素調(diào)節(jié)下進(jìn)行的，它們對、卵子在輸卵管內(nèi)的遷移、停留和經(jīng)歷受精前的生理、生化改變及受精卵和胚胎的早期發(fā)育起著至關(guān)重要的作用 ［1］ 。 1 輸卵管微環(huán)境中細(xì)胞因子表達(dá) 1.1 白血病抑制因子（LIF） LIF是一種具有廣泛生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，能調(diào)節(jié)胚胎干細(xì)胞、原始生長細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞的生長和分化，LIF及其受體（ILFR）在女性生殖系統(tǒng)的表達(dá)，隨月經(jīng)周期而變化，故認(rèn)為與生殖密切相關(guān)。對于人體輸卵管組織進(jìn)行研究表明:輸卵管上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)LIF/ILFR，上皮細(xì)胞表達(dá)的強(qiáng)度大于間質(zhì)細(xì)胞，輸卵管傘部表達(dá)較高，分泌期表達(dá)大于增殖晚期，LIF與LIFR在輸卵管組織中動(dòng)態(tài)表達(dá)與子宮內(nèi)膜的表達(dá)一致;在分泌期，輸卵管LIF表達(dá)增加，為受精卵、早期胚胎發(fā)育、轉(zhuǎn)運(yùn)和成功種植創(chuàng)造了適宜的生理環(huán)境，對胚胎有營養(yǎng)和增強(qiáng)生存能力的作用。正常輸卵管LIF表達(dá)維持較低水平，培養(yǎng)的輸卵管片段在經(jīng)過生長因子:表皮生長因子（EGF）、轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）及炎癥因子:腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1（IL-1）等處理后，LIF在基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)明顯增強(qiáng)，推測LIF、LIFR表達(dá)增強(qiáng)可能與輸卵管炎、輸卵管妊娠有關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn):妊娠的輸卵管LIF表達(dá)明顯增高，推測輸卵管合成和分泌LIF在促進(jìn)早期囊胚發(fā)育的同時(shí)，也有接受孕卵著床的作用 ［2，3］ 。 1.2 表皮生長因子（EGF） EGF具有多方面的生理功能，不僅與機(jī)體的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、糖代謝、細(xì)胞增殖、成纖維細(xì)胞的游走等有關(guān)，并且在生殖過程中起重要作用。輸卵管上皮細(xì)胞表達(dá)EGF、表皮生長因子受體（EGFR），隨月經(jīng)周期變化，在增殖晚期、分泌期明顯高于增殖早期，這種周期性變化與雌激素水平相關(guān)，EGFR與配體EGF結(jié)合，通過旁分泌、自分泌機(jī)制刺激上皮細(xì)胞生長，參與卵子、在輸卵管的成熟及受精卵的早期發(fā)育;HB-EGF為EGF家族成員之一，與EGFR及硫酸乙酰肝素蛋白多糖（HSPG）結(jié)合發(fā)揮生物作用，其作用EGF強(qiáng)，胚泡種植前期輸卵管峽部、壺腹部有HB-EGF的表達(dá)，可能也參與卵子、在輸卵管的成熟及受精卵的早期發(fā)育 ［4～6］ 。 1.3 腫瘤壞死因子α（TNF-α） TNF-α是一種單核細(xì)胞因子，主要由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，具有殺傷腫瘤、抗感染、促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用，TNF-α可激活局部單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，并產(chǎn)生更多的TNF-α，在抗感染同時(shí)造成組織損傷;TNF-α及受體（TNF-αR）在輸卵管組織表達(dá)，隨月經(jīng)周期變化，在卵泡期及排卵后高表達(dá)，黃體期未見表達(dá)，TNF-α可刺激輸卵管分泌前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）、前列腺素F2αprostaglandin F2alpha，PGF2α），內(nèi)皮素（endothelin-1，ET-1）和血管緊張素ⅡangiotensinⅡ，AngⅡ）等，這些物質(zhì)可刺激平滑肌細(xì)胞收縮，與輸卵管內(nèi)配子及早期囊胚的運(yùn)輸有關(guān)。輸卵管感染沙眼衣原體（CT）、淋球菌等后，輸卵管液中TNF-α及TNF-αR升高，其中TNF-α與輸卵管損傷程度呈正相關(guān)，TNF-α分泌越多，則輸卵管纖毛損傷越嚴(yán)重，影響胚胎的運(yùn)輸;輸卵管液中TNF-α濃度增高，影響配子及胚胎質(zhì)量，故輸卵管炎易導(dǎo)致異位妊娠;異位妊娠患者血清中TNF-α顯著升高，TNF-α在異位妊娠中的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究 ［7～10］ 。 1.4 白細(xì)胞介素8（IL-8） IL-8是白細(xì)胞趨化因子之一，參與炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。在基礎(chǔ)狀態(tài)下，人體輸卵管上皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)IL-8不同，輸卵管上皮細(xì)胞表達(dá)IL-8mRNA高，基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)IL-8mRNA低，在IL-1α、TNF-α等前炎癥因子刺激下，輸卵管基質(zhì)細(xì)胞IL-8的分泌增加，而上皮細(xì)胞IL-8的分泌無增加;此結(jié)果提示IL-8與輸卵管炎的病理損傷有關(guān)。宮外孕患者血清中IL-8水平較流產(chǎn)、正常妊娠者血清中IL-8水平高;提示IL-8與異位妊娠有關(guān)，其作用機(jī)制待進(jìn)一步研究 ［9，10］ 。

1.5 干擾素γ（IFN-γ） IFN-γ具有誘導(dǎo)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等細(xì)胞MHC-Ⅱ類抗原表達(dá)，參與抗原提呈和特異性免疫識(shí)別過程。IFN-γ參與抵抗輸卵管CT感染，在抗感染的同時(shí)促進(jìn)輸卵管炎癥損傷和纖維化，IFN-γ介導(dǎo)的組織損傷機(jī)制可能為:IFN-γ使CT的57kD在局部組織堆積引起超敏反應(yīng)，誘導(dǎo)輸卵管上皮細(xì)胞膜異常表達(dá)MHC-Ⅱ類抗原，呈遞給自身反應(yīng)性T細(xì)胞，啟動(dòng)自身免疫及刺激其它細(xì)胞因子（如:IL-1、TNF-α等）分泌，造成組織增生、纖維化 ［12］ 。 2 輸卵管微環(huán)境中粘附分子的表達(dá) 粘附分子廣泛分布于全身各組織，在胚胎發(fā)育、分化、正常組織結(jié)構(gòu)維持、炎癥免疫應(yīng)答，傷口愈合、凝血及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等諸多生理、病理過程中具有重要作用。輸卵管峽部、壺腹部和傘部粘膜上皮纖毛細(xì)胞表達(dá)整合素β 3 ，隨月經(jīng)周期而變化:排卵后輸卵管峽部纖毛細(xì)胞整合素β 3 的含量顯著增加，為發(fā)揮“儲(chǔ)器”的功能，提供一個(gè)分子機(jī)制，壺腹部粘膜上皮纖毛細(xì)胞整合素β 3 含量排卵后顯著下降，此時(shí)輸卵管對胚胎的容受性下降，可降低或避免早期胚胎在輸卵管壺腹部植入，傘部粘膜纖毛分泌整合素β 3 排卵期升高，可能與傘部拾卵有關(guān);正常輸卵管粘膜上皮基底膜、粘膜基質(zhì)表達(dá)纖維粘連蛋白（FN），且增殖期大于分泌期，排卵前達(dá)到高峰，排卵后顯著下降，F(xiàn)N具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化、促進(jìn)細(xì)胞遷移、增殖和信息傳遞的功能，受雌、孕激素影響，雌激素促進(jìn)其表達(dá)，孕激素抑制其表達(dá)，為防止輸卵管妊娠機(jī)制之一。在炎癥存在時(shí)輸卵管粘膜上皮基底膜、粘膜基質(zhì)、血管內(nèi)皮基底膜表達(dá):FN、表皮細(xì)胞間粘附分子ECAM）、細(xì)胞間粘附分子（ICAM）、血管細(xì)胞間粘附分子（VCAM）等增加，提示:輸卵管炎時(shí)輸卵管粘膜高表達(dá)粘附分子可能為輸卵管妊娠的機(jī)制之一。Qin等研究發(fā)現(xiàn):輸卵管妊娠3～9周的母胎界面有整合素和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的表達(dá)，輸卵管妊娠5～7周達(dá)高峰，參與滋養(yǎng)細(xì)胞粘附與侵入 ［13～15］ 。 3 輸卵管微環(huán)境中的蛋白質(zhì)及其作用 3.1 輸卵管特異性糖蛋白（OGP） OGP是輸卵管上皮細(xì)胞合成和分泌的糖蛋白，該糖蛋白在排卵期、受精期及早期囊胚發(fā)育階段的輸卵管內(nèi)含量較高，與血清中雌、孕激素和黃體生成素水平有關(guān)，其對、卵子受精前的準(zhǔn)備和早期囊胚的發(fā)育起重要作用。純化的人輸卵管蛋白與卵子共同培養(yǎng)時(shí)，可以看到其首先與卵透明帶結(jié)合，進(jìn)而促進(jìn)與卵透明帶結(jié)合，并且形成了輸卵管上皮與早期囊胚間的排斥力，保證早期囊胚在輸卵管內(nèi)自如活動(dòng)，再聯(lián)合輸卵管纖毛擺動(dòng)、平滑肌收縮，防止異位妊娠的發(fā)生。狒狒的OGP與人的OGP具有高度同源性，但狒狒的OGP可以抑制人和卵子的結(jié)合，提示OGP在防止異種精卵結(jié)合，維持種屬特異性方面發(fā)揮作用。通過體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)對比發(fā)現(xiàn):相同條件下，在體內(nèi)OGP與卵透明帶（zona pellucida，ZP）結(jié)合明顯高于體外，在體內(nèi)可能有其它物質(zhì)參與OGP作用的調(diào)節(jié)，故體外研究OGP機(jī)能是受限的。Woo等研究發(fā)現(xiàn):OGP作為輸卵管上皮細(xì)胞分化的標(biāo)志物，在卵巢組織也有表達(dá)，且表達(dá)強(qiáng)度不同:在正常卵巢組織呈陰性表達(dá)，在卵巢良性、交界性漿液瘤及早期卵巢癌呈陽性表達(dá)，而在十二指腸、回腸、胰腺表達(dá)極微弱，在46種非婦科腫瘤呈陰性表達(dá);提示:OGP可作為卵巢囊腫及早期卵巢癌的標(biāo)志 物 ［16～18］ 。 3.2 輸卵管素（oviductin） 輸卵管素也是人輸卵管上皮細(xì)胞合成和分泌的蛋白質(zhì)，可與結(jié)合，增加獲能效應(yīng)和穿透能力，從而有利于與卵透明帶結(jié)合及頂體反應(yīng)發(fā)生;并且與選擇性結(jié)合，對起到了篩選作用。輸卵管素與ZP和/或卵黃周隙（perivitelline space，PV）結(jié)合，卵裂開始后位于2-細(xì)胞、4-細(xì)胞、8-細(xì)胞和早期囊胚的質(zhì)膜，增強(qiáng)早期囊胚發(fā)育能力，隨后逐漸降解。其中發(fā)育促進(jìn)因子-1（DPF-1）容易遷移過卵透明帶，進(jìn)入內(nèi)層，呈點(diǎn)狀分布，與早期囊胚細(xì)胞膜牢固地結(jié)合，可克服早期囊胚體外發(fā)育過程中的發(fā)育停滯，支持體外卵裂的發(fā)生。持續(xù)腹腔注射DPF-1抗體，胚胎的植入率下降，提示DPF-1有克服早期囊胚發(fā)育停滯的作用 ［19～22］ 。 總之，輸卵管微環(huán)境中細(xì)胞因子、粘附因子、特異性蛋白質(zhì)等對輸卵管功能起重要作用，并且受激素的影響，相互作用機(jī)制極其復(fù)雜;輸卵管病理變化、組織損傷可能導(dǎo)致輸卵管微環(huán)境中物質(zhì)變化，引起輸卵管功能失常，導(dǎo)致輸卵管性不孕、輸卵管妊娠發(fā)生;對輸卵管微環(huán)境有待進(jìn)一步了解，揭示輸卵管性不孕、輸卵管妊娠機(jī)制，為防治疾病、尋找更有效的避孕措施及提高IVF的成功率提供理論依據(jù)。

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細(xì)胞因子范文第5篇

【摘要】

目的: 觀察CRLF3蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá)及亞細(xì)胞定位， 并在大腸桿菌中表達(dá)和純化了重組CRLF3蛋白。方法: 將真核表達(dá)載體pCMVmycCRLF3瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞， 轉(zhuǎn)染24 h和48 h后免疫熒光染色， 共聚焦顯微鏡觀察蛋白表達(dá)及定位; 構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX4T1CRLF3， 實(shí)現(xiàn)插入基因的融合表達(dá)， 經(jīng)GST親合層析純化蛋白。結(jié)果: CRLF3蛋白在293T細(xì)胞中高效表達(dá)， 主要分布在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜; 成功構(gòu)建了表達(dá)CRLF3融合蛋白的原核表達(dá)載體， 并在大腸桿菌內(nèi)高效表達(dá)， 純化后得到Mr 約為74000的融合蛋白。結(jié)論: 在真核細(xì)胞中過表達(dá)的CRLF3蛋白主要定位在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜; 獲得了重組GSTCRLF3融合蛋白，為進(jìn)一步探討CRLF3的功能奠定基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】 人細(xì)胞因子受體樣因子3 真核表達(dá) 原核表達(dá) 蛋白純化

[Abstract]AIM: Cytokine receptorlike factor 3 (CRLF3) is a novel gene cloned from K562 cell line. The aim of the current study is to observe CRLF3 expression and subcellular localization in 293T cells and to express and purify the CRLF3 fusion protein in E.coli. METHODS: The plasmid pCMVmycCRLF3 was transiently transfected into 293T cell. The expression and localization of CRLF3 protein was observed by immunostaining approach. CRLF3 was also cloned into pGEX4T1 vector. The GSTCRLF3 fusion protein was expressed in E.coli and purified by GST affinity chromatography． RESULTS: CRLF3 protein was highly expressed in transfected 293T cells. CRLF3 protein was distributed in both cytoplasm and cell membrane. The GSTCRLF3 fusion protein was expressed as a Mr 74 000 protein and then successfully purified from E.coli cells. CONCLUSION: Overexpressed CRLF3 is a cytoplasmic protein that distributes in both cytoplasm and cell membrane in mammalian cells. The recombinant GSTCRLF3 fusion protein had been isolated and could be used for further antibody production and functional characterization.

[Keywords]CRLF3; eukaryotic expression; prokaryotic expression; protein purification

人細(xì)胞因子受體樣因子3（cytokine receptorlike factor 3， CRLF3）是一個(gè)具有I類細(xì)胞因子受體保守功能域的新基因。本實(shí)驗(yàn)室從K562細(xì)胞中克隆出CRLF3[1]， 并提交NCBI GenBank（DQ298450）。CRLF3基因編碼區(qū)全長1317 bp， 編碼一個(gè)438個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。生物信息學(xué)分析CRLF3定位在17q11.2， 具有一個(gè)重要的結(jié)構(gòu)域——FN3功能域， 這一結(jié)構(gòu)域的C末端， 有一個(gè)RGD基序和I類細(xì)胞因子受體特有的WSXWS基序， CRLF3基因保守存在于多種生物中。對CRLF3的功能研究表明CRLF3 的過表達(dá)可以抑制細(xì)胞周期， 使細(xì)胞停滯在G0/G1期， 減少了進(jìn)入S期的細(xì)胞， 其作用機(jī)制尚不明確。CRLF3可能是一種交通信號(hào)分子。本研究中， 我們將CRLF3基因在真核細(xì)胞中表達(dá)， 觀察了CRLF3在真核細(xì)胞中的定位， 并在原核細(xì)胞中表達(dá)和純化了其融合蛋白， 為進(jìn)一步研究CRLF3的功能奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 材料 真核表達(dá)質(zhì)粒pCMVmycCRLF3、 人胚腎293T細(xì)胞、 融合表達(dá)載體pGEX4T1、 E.coli DH5α、 E.coli BL21(DE3)均由本室保存; MEM、 胎牛血清購自Gibco公司; T4連接酶、 BamH I、 Xho I限制性內(nèi)切酶、 λEcoT14I digest DNA marker、 蛋白maker均購自TaKaRa公司; 磷酸鈣轉(zhuǎn)染試劑購自碧云天生物技術(shù)公司; cMyc抗體購自Santa Cruz公司; FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG購自中杉金橋公司; GSTTag抗體購自Proteintech公司; Glutathione Sepharose 4B購自GE Healthcare公司; PCR引物由上海英俊生物技術(shù)公司合成; 其他均為國產(chǎn)分析純生化試劑。

1.2 方法

1.2.1 293T細(xì)胞的培養(yǎng)和pCMVmycCRLF3的轉(zhuǎn)染 將生長狀態(tài)良好的293T細(xì)胞按1×105 cells/孔的密度轉(zhuǎn)移到放玻片的6孔板中， 在含100 mL/L胎牛血清的MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h。轉(zhuǎn)染前30 min， 換新鮮的培養(yǎng)液2 mL， 分別取5 μg空載體質(zhì)粒和pCMVmycCRLF3與磷酸鈣轉(zhuǎn)染試劑混勻， 室溫孵育20 min， 均勻滴加到6孔板內(nèi)， 在50 mL/LCO2， 37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h和48 h。

1.2.2 免疫熒光染色 轉(zhuǎn)染24 h和48 h后， 棄去培養(yǎng)液， 多聚甲醛固定20 min， 5 mL/L TritonX100去膜10 min。含100 mL/L胎牛血清的PBS封閉1 h， 加入抗cmyc抗體（1∶100）室溫孵育1 h， PBST充分洗滌。加入FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG（1∶100）室溫孵育1～2 h， PBST充分洗滌。最后加入0.5 g/L DAPI(聯(lián)瞇基苯吲哚酸鹽)標(biāo)記細(xì)胞核15min， 洗滌后500mL/L甘油封片， 共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果。

1.2.3 pGEX4T1CRLF3融合表達(dá)載體的構(gòu)建 以本室構(gòu)建的pCMVmycCRLF3質(zhì)粒為模板， 根據(jù)已測得的CRLF3的全長序列設(shè)計(jì)引物， 進(jìn)行PCR擴(kuò)增。上游引物序列為5′TATA GGATCC ATG GAG CTG GAG CCT GAG CT3′， 其中導(dǎo)人BamH I酶切位點(diǎn); 下游引物序列為5′TATA CTCGAG CTA AAA CAC TAA CAC TTT CC3′， 其中導(dǎo)人Xho I酶切位點(diǎn)。PCR產(chǎn)物經(jīng)10 g/L的瓊脂糖凝膠電泳回收， BamH I和Xho I酶切pGEX4T1載體和PCR產(chǎn)物， T4連接酶連接， 轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞。挑取單個(gè)克隆于5 mL LB(Amp+)培養(yǎng)液中培養(yǎng)過夜， 提取重組質(zhì)粒， BamH I/Xho I酶切鑒定， 陽性克隆提交上海英俊生物技術(shù)公司進(jìn)行測序分析。

1.2.4 GSTCRLF3融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)和純化 將序列正確的重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX4T1CRLF3轉(zhuǎn)化宿主菌BL21（DE3）， 挑選5個(gè)單個(gè)菌落分別接種到5 mL LB（Amp＋）管中， 與37℃劇烈搖動(dòng)培養(yǎng)過夜。每個(gè)菌落的培養(yǎng)物按1/100的比例接種到2個(gè)新鮮LB（Amp＋）管中， 37℃劇烈搖動(dòng)培養(yǎng)4 h， A550達(dá)到0.6～0.8后， 向其中一管中加入終濃度為1 mmol/L IPTG， 另一管為未誘導(dǎo)的對照菌， 30℃繼續(xù)培養(yǎng)3～4 h。離心收集培養(yǎng)液各1 mL， 菌體沉淀以100 μL PBS重懸， 取10 μL樣品進(jìn)行120 g/L SDSPAGE電泳， 考馬斯亮藍(lán)染色。以空載體轉(zhuǎn)化的大腸桿菌BL21(DE3)作為陰性對照， 檢測蛋白表達(dá)情況， 選出蛋白表達(dá)量高的菌落做種子。

1.2.5 融合蛋白的大量表達(dá)和純化 選取融合蛋白表達(dá)量高的種子菌， 以終濃度為1 mmol/L IPTG大量誘導(dǎo)菌液500 mL， 離心收集菌體， 1×PBS(pH7.4)懸浮菌體， 冰浴條件下超聲破裂菌體， 4℃、 120000 r/min離心30 min， 取少量上清和沉淀， 進(jìn)行SDSPAGE檢測， 分析蛋白質(zhì)在胞內(nèi)表達(dá)形式。確定目的蛋白以可溶性形式存在后， 取超聲上清過裝有500 μL Glutathione Sepharose 4B凝膠的純化柱， 以1 L的PBS淋洗， 去除雜蛋白， 最后用1倍柱體積的GST洗脫緩沖液 (50 mmol/L TrisHC1 pH8.0， 10 mmol/L還原型谷胱甘肽)洗脫目的蛋白。

1.2.6 Western blot鑒定融合蛋白 取純化的蛋白進(jìn)行120 g/L丙烯酰胺凝膠電泳， 電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上， 50 g/L脫脂奶粉4℃封閉過夜。加入GST抗體（1∶2500）室溫孵育2 h， TBST充分洗滌， 加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗（1∶5000）， 室溫孵育1 h， TBST充分洗滌， ECL顯影。

2 結(jié)果

2.1 共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果 采用共聚焦顯微鏡觀察CRLF3蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá)及分布。以轉(zhuǎn)染pCMVmyc空載體的293T細(xì)胞為本底對照， 40倍物鏡下觀察可見CRLF3在真核細(xì)胞中高效表達(dá)。油鏡下觀察可見瞬時(shí)轉(zhuǎn)染24h后的CRLF3均勻分布在胞質(zhì)中; 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染48 h后的CRLF3分布在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上（圖1）。

圖1 轉(zhuǎn)染24 h和48 h后免疫熒光染色（略）

Fig 1 Immunostaining of CRLF3 on 293T cell transfecting pCMVmycCRLF3 after 24 h and 48 h(×1000)

A: Antimyc after 24 h; B: DAPI; C: Merged; D: Antimyc after 48 h; E: DAPI; F: Merged.

2.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定 以pCMVmycCRLF3質(zhì)粒為模板擴(kuò)增的產(chǎn)物經(jīng)10 g/L瓊脂糖凝膠電泳， 得到一條特異條帶， 與目的片段1318 bp的大小位置相符（圖2）。重組質(zhì)粒pGEX4T1CRLF3采用BamH I/Xho I酶切鑒定（圖3）， DNA測序分析， 證明插入序列是目的序列， 且與融合表達(dá)載體的讀碼框相符。

圖2 CRLF3 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物（略）

Fig 2 CRLF3 product of PCR

1: CRLF3 PCR product; 2: λEcoT14I digest DNA marker.

圖3 重組質(zhì)粒pGEX4T1CRLF3的酶切鑒定（略）

Fig 3 Restriction analysis of recombinant plasmid pGEX4T1CRLF3

1: λEcoT14I digest DNA marker; 2: pGEX4T1CRLF3 digested by BamH I and Xho I.

2.3 重組蛋白在大腸桿菌BL21中的表達(dá)和純化 SDSPAGE結(jié)果顯示， 轉(zhuǎn)化空載體的對照組BL21 IPTG誘導(dǎo)后， 在Mr 26000的位置上出現(xiàn)1條濃集帶; 轉(zhuǎn)化pGEX4T1CRLF3重組質(zhì)粒的BL21 IPTG誘導(dǎo)后， 在Mr約為74000的位置上出現(xiàn)1條較濃集而且表達(dá)量受IPTG誘導(dǎo)的蛋白條帶， 說明插人的融合基因已經(jīng)在大腸桿菌中表達(dá)， 但在這一位點(diǎn)上也有內(nèi)源性基因的表達(dá)。超聲破碎菌體并離心后， 分別取上清和沉淀進(jìn)行SDSPAGE電泳檢測， 顯示目的蛋白主要在上清液中， 它在菌體內(nèi)主要以可溶性形式存在; 利用Glutathione Sepharose 4B親和純化目的蛋白， SDSPAGE分析得到1條Mr為74000的單一條帶?；叶葤呙璺治觯?純度達(dá)到85%（圖4）。

圖4 SDSPAGE分析融合蛋白的表達(dá)及純化（略）

Fig 4 SDSPAGE analysis of expression and purification of fusion protein

1: Protein maker; 2: pGEX4T1 transformed BL21（IPTG-）; 3: pGEX4T1 transformed BL21（IPTG＋）; 4: pGEX4T1CRLF3 transformed BL21（IPTG-）; 5: pGEX4T1CRLF3 transformed BL21（IPTG＋）; 6: Supernatant; 7: Sediment; 8: Purified fusion protein.

2.4 Western blot檢測 用抗GSTtag多克隆抗體對純化的GSTCRLF3融合蛋白進(jìn)行Western blot檢測?？笹ST的抗體可以檢測到Mr為74000的CRLF3融合蛋白條帶， 提示純化后的蛋白為所需要的GST融合蛋白。

3 討論

CRLF3基因定位在17q11.2， 鄰近NF1 (neurofibromatosis type 1)基因， 在神經(jīng)纖維瘤患者中， CRLF3基因常與NF1一起缺失。神經(jīng)纖維瘤的遺傳學(xué)致病機(jī)制是由于NF1基因的微缺失， 其缺失的范圍至少包括11個(gè)基因， CRLF3為其中之一[2， 3]。NF1基因是一種抑癌基因[4]， 而缺失基因簇中的其他基因功能尚不清楚。對CRLF3的生物信息學(xué)預(yù)測， 它不具有跨膜結(jié)構(gòu)域， 沒有核定位信號(hào)與細(xì)胞器定位信號(hào)， 是一種胞質(zhì)蛋白質(zhì)。本研究中通過在真核細(xì)胞中表達(dá)CRLF3， 可見CRLF3轉(zhuǎn)染24 h后主要定位在細(xì)胞質(zhì)， 轉(zhuǎn)染48 h后， 則在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上均有分布， 提示在真核細(xì)胞中過表達(dá)的CRLF3是一種胞質(zhì)蛋白質(zhì)， 充分表達(dá)后向細(xì)胞膜遷移。CRLF3含有FN3功能域和RGD基序， 含有這樣結(jié)構(gòu)域的分子大部分具有介導(dǎo)細(xì)胞間黏附和相互作用的功能， 而且主要以受體和分泌形式存在[5]。具有RGD基序的胞質(zhì)蛋白CRLF3是否也具有介導(dǎo)細(xì)胞間黏附和相互作用的功能， 或在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)揮通訊分子的作用，有待進(jìn)一步探討。

本研究中， 我們利用可誘導(dǎo)表達(dá)的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)， 以原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX4T1為載體表達(dá)出GSTCRLF3的融合蛋白， 進(jìn)一步應(yīng)用GST親和層析法有效分離得到純化的目的基因CRLF3的融合蛋白[6]， 為下一步制備抗CRLF3的多克隆抗體， 更好的研究CRLF3的功能創(chuàng)造條件。

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