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化學(xué)發(fā)光免疫范文第1篇

[關(guān)鍵詞]化學(xué)發(fā)光免疫分析；免疫傳感；快速檢測

中圖分類號：TP317 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）14-0049-01

近年來，化學(xué)發(fā)光免疫分析法備受人們的青睞，主要是因?yàn)榇朔椒ň哂懈哽`敏度、強(qiáng)特異性、廣適用面和設(shè)備簡單等特點(diǎn)。在臨床醫(yī)學(xué)、食品藥物等領(lǐng)域，此方法被廣泛應(yīng)用于抗原與抗體間的識別。生物分子的體積大、擴(kuò)散率比較小，所加之對識別微電具有空間阻礙作用，所以受到傳質(zhì)速率和反應(yīng)動力學(xué)控制的免疫反應(yīng)速率一般都會比較低。傳統(tǒng)的免疫分析方法需要的溫育時(shí)間比較長，大大限制了樣品測試的通量和適用范圍。所以為了縮短免疫分析的時(shí)間，需要不斷的進(jìn)行技術(shù)創(chuàng)新，從而擴(kuò)展化學(xué)發(fā)光免疫分析的應(yīng)用范圍。

一、化學(xué)發(fā)光免疫分析法

化學(xué)發(fā)光分析是一種利用化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的輻射光的強(qiáng)度來進(jìn)行物質(zhì)含量確定的分析方法。這種分析是化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)和免疫反應(yīng)的完美結(jié)合，主要是利用化學(xué)發(fā)光的相關(guān)物質(zhì)對抗體或者是抗原進(jìn)行標(biāo)記，等到與需要進(jìn)行測定的抗原或者抗體反應(yīng)之后，再利用分離游離態(tài)化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的方法，使得加入到化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)中的其他相關(guān)物產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，然后進(jìn)行抗原或者是抗體的定量或者是定性的檢測。在化學(xué)發(fā)光免疫分析中，主要使用4類標(biāo)記物，分別是異魯米諾及其衍生

物、過氧化物酶和堿性磷酸酶、魯米諾和吖啶酯衍生物。在目前的化學(xué)發(fā)光免疫分析法中，以酶為標(biāo)記物的化學(xué)發(fā)光是應(yīng)用的主流。常用的標(biāo)記酶是堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶。利用酶來做標(biāo)記物主要是因?yàn)槊妇哂邢鄳?yīng)的化學(xué)發(fā)光底物，在臨床上的應(yīng)用比較廣泛。

在化學(xué)發(fā)光免疫分析方法中不可避免的會利用到標(biāo)記技術(shù)，而標(biāo)記技術(shù)是現(xiàn)代免疫分析的關(guān)鍵性技術(shù)之一。新的標(biāo)記免疫分析技術(shù)，在目前的社會諸多領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用，并且展示了非常不錯的發(fā)展前景。在實(shí)際標(biāo)記技術(shù)的應(yīng)用中，納米技術(shù)廣泛的用于生物標(biāo)記，主要是因?yàn)榧{米粒子具有非常良好的生物相容性，而且具有信號放大的效果。在實(shí)際應(yīng)用中，量子點(diǎn)就是一種半導(dǎo)體納米顆粒，所以在發(fā)光免疫分析法中被大量的使用。

二、化學(xué)發(fā)光免疫分析法的應(yīng)用

（一） 快速化學(xué)發(fā)光免疫分析方法

傳統(tǒng)的免疫分析方法需要的時(shí)間比較長，而且由于時(shí)間的延長往往會導(dǎo)致免疫試劑吸附在管道的內(nèi)壁上，這樣就會造成不同測定間的信號交叉，對于測定結(jié)果的準(zhǔn)確度具有嚴(yán)重的影響。為了實(shí)現(xiàn)免疫分析的高通量，克服傳統(tǒng)方法的不足，可以通過利用外場的驅(qū)動或者是利用溶液來進(jìn)行有效混合策略，以此來達(dá)到加快抗原或者是抗體等大分子的傳質(zhì)速率。在實(shí)際中，還可以通過提高整個(gè)反應(yīng)體系的溫度來進(jìn)行免疫反應(yīng)動力學(xué)的加速，這樣也可以實(shí)現(xiàn)快速的免疫檢測。

在提高傳質(zhì)速率的方法選擇上，主要有四種備選方案，分別是改變電滲流、超聲波驅(qū)動、電磁攪拌和電場驅(qū)動。通過這種提高傳質(zhì)速率的方法，可以有效的實(shí)現(xiàn)快速檢測，一般在3分鐘之內(nèi)就可以完成檢測工作。除去提高傳質(zhì)速率的方法，外力驅(qū)動的加速也會提高檢測，在實(shí)際應(yīng)用中，利用外力驅(qū)動的加速效果，可以在16分鐘內(nèi)完成整個(gè)測定分析工作。

（二） 多組分化學(xué)發(fā)光免疫分析方法

多組分化學(xué)發(fā)光免疫分析方法也是化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的一種重要應(yīng)用。在單個(gè)的分析流程中，同時(shí)實(shí)現(xiàn)多組分的檢測，具有的優(yōu)勢非常顯著。利用這種方法，不僅所需要的時(shí)間短、樣品的消耗量比較少，而且分析的通量高，分析成本整體較低。這些優(yōu)勢都是免疫分析長期追求的目標(biāo)，也是未來免疫分析的發(fā)展研究熱點(diǎn)。多組分免疫分析模式主要有兩種實(shí)踐模式，分別是：多組分同時(shí)檢測模式和順序檢測模式。在實(shí)際應(yīng)用當(dāng)中，同時(shí)檢測模式往往會與空間分辨技術(shù)，還有陣列檢測器同時(shí)進(jìn)行結(jié)合檢測，而順序檢測一般是在同一個(gè)時(shí)間期限內(nèi)對多個(gè)組分進(jìn)行分別檢測。近年來由于安培免疫傳感器陣列在多組分免疫分析中的廣泛應(yīng)用，多組分化學(xué)發(fā)光免疫分析的方法獲得了非?？焖俚陌l(fā)展。多組分化學(xué)發(fā)光免疫分析法的廣泛使用得益于其他技術(shù)的長足進(jìn)步，也就是說多組分化學(xué)發(fā)光免洗分析的發(fā)展要建立在與其相關(guān)技術(shù)的發(fā)展基礎(chǔ)上，所以這種技術(shù)在未來的發(fā)展?jié)摿薮蟆?/p>

（三） 高靈敏化學(xué)發(fā)光免疫分析方法

從過去的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)中得知，現(xiàn)有的檢測手段其靈敏度和特異性都不是很理想，所以選擇高靈敏度的檢測方法越來越重要。納米技術(shù)快速發(fā)展和在檢測中的應(yīng)用為實(shí)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光免疫分析的高靈敏度提供了可能。就目前的情況而言，納米粒子在生物分析中得到了廣泛的使用，其信號放大的功效對于高靈敏免疫分析方法的構(gòu)建非常有幫助。

通過研究發(fā)現(xiàn)不同粒徑的納米粒子可以增強(qiáng)魯米諾過氧化氫體系的化學(xué)發(fā)光 ，在試驗(yàn)中，38 nm 粒徑的納米粒子的增強(qiáng)效果最為顯著。通過實(shí)驗(yàn)，合成的特殊形狀的不規(guī)則金納米粒子，對魯米諾過氧化氫化學(xué)發(fā)光體系的催化活性是普通納米粒子的100倍。在試驗(yàn)中，將抗體固定在不規(guī)則金納米粒子表面后發(fā)現(xiàn)，會形成夾心免疫復(fù)合物，這中復(fù)合物對于信號的放大，其效果更加的顯著。也正是通過試驗(yàn)得知，將納米粒子廣泛應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光免疫分析中時(shí)，由于其信號放大的效果顯著，測定分析的敏感性和準(zhǔn)確度顯著加強(qiáng)。

三、發(fā)展與展望

化學(xué)發(fā)光免疫分析方法在目前的生命科學(xué)領(lǐng)域、食品、藥物的測定等方面被廣泛的使用，而且隨著我國對食品安全的重視程度不斷加深，測定范圍和深度肯定會逐漸增加?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析方法其本身就具有成本低、操作簡單、靈敏度較高、測定速度快等突出的優(yōu)勢，在未來的發(fā)展中這些優(yōu)勢會被充分的利用，化學(xué)發(fā)光免疫分析法的適用范圍也會更加的廣泛。再者，化學(xué)發(fā)光免疫分析法與技術(shù)的進(jìn)步有著密切的關(guān)系，隨著未來技術(shù)的不斷進(jìn)步，與化學(xué)發(fā)光免疫分析法相關(guān)的技術(shù)會得到不斷地改進(jìn)和發(fā)展，這對于化學(xué)發(fā)光免疫分析法來說，是一個(gè)強(qiáng)有力的助推力。

結(jié)束語

化學(xué)發(fā)光免疫分析方法因?yàn)槠鋬?yōu)勢突出所以在目前的各個(gè)領(lǐng)域具有非常廣泛的應(yīng)用。在實(shí)際應(yīng)用中，一定要不斷的加深對此方法的認(rèn)識深度，不斷地提高利用此方法的技術(shù)，使這種技術(shù)更好的為現(xiàn)代的測定工作來服務(wù)。

參考文獻(xiàn)

[1]汪晨，吳潔，宗晨，徐潔，鞠合.化學(xué)發(fā)光免疫分析方法與應(yīng)用進(jìn)展[J].分析化學(xué)，2012，01：3-10.

[2]金茂俊，邵華，金芬，王靜.化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的研究及應(yīng)用[J].農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全，2012，02：42-46.

[3]金茂俊，王靜，楊麗華，杜鵬飛，邵華，金芬，王珊珊，佘永新.化學(xué)發(fā)光免疫分析方法在食品安全檢測中的研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2014，03：840-845.

[4]肖勤，林金明.化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].分析化學(xué)，2015，06：929-938.

化學(xué)發(fā)光免疫范文第2篇

關(guān)鍵詞梅毒;化學(xué)發(fā)光法;膠體金

梅毒(Syphilis)是由梅毒螺旋抗體(又稱蒼白螺旋體)引起的常見性傳播疾病之一。其臨床病程漫長,臨床表現(xiàn)極為復(fù)雜,幾乎可侵犯皮膚粘膜,晚期侵犯內(nèi)臟器官。實(shí)驗(yàn)室可以通過檢測血液中的非特異性抗體和特異性抗體[2],判斷是否感染梅毒螺旋體。現(xiàn)采用化學(xué)發(fā)光免疫法和膠體金法檢測190例梅毒患者的血清標(biāo)本,結(jié)果報(bào)告入下。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源

經(jīng)病史、臨床癥狀及血清學(xué)實(shí)驗(yàn)確診的梅毒患者的血清標(biāo)本190例。

1.2 試劑

科美CHEMCLIN600全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,試劑是由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供的配套試劑盒,(膠體金法)梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒是由廣州萬孚生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3 方法

采用化學(xué)發(fā)光免疫法和膠體金法嚴(yán)格按照說明書對190例確診標(biāo)本進(jìn)行檢測。

1.4 結(jié)果判定

化學(xué)發(fā)光免疫法的結(jié)果判定:臨界值=2.1×N(N為陰性對照RLU的平均值),待測樣品RLU值≥臨界值,判定為陽性,待測樣品RLU值

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)數(shù)資料比較用X2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測結(jié)果如下(見表1)

3 討論

梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷常依靠血清學(xué)檢查,當(dāng)梅毒螺旋體進(jìn)入人體3～6周后可檢出兩種抗體,一種是針對螺旋體抗原的抗體,另一種是針對非螺旋體抗原的抗體。

膠體金法采用純化重組基因的梅毒抗原,以膠體金作為指示標(biāo)記,于硝酸纖維素膜上進(jìn)行反應(yīng),以雙抗原夾心法原理快速定性檢測血清中的梅毒螺旋體特異性抗體。本組膠體金方法對Ⅰ期梅毒的陽性率為90.6%;Ⅱ期梅毒的陽性率為100%;潛伏梅毒的陽性率為33.3%。因此膠體金法對特異性梅毒螺旋體濃度過低時(shí)會產(chǎn)生假陰性反應(yīng),但是此法快速簡便,結(jié)果容易觀察,適用于臨床急診標(biāo)本。

化學(xué)發(fā)光免疫法是采用一步法雙抗原夾心免疫分析模式,屬于梅毒螺旋體抗原結(jié)合實(shí)驗(yàn),使用多種TP特異性蛋白抗原制備固相抗原,辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的相同蛋白作為標(biāo)記抗原,與樣品中的梅毒螺旋體抗體形成雙抗原夾心。經(jīng)洗滌后,加入化學(xué)發(fā)光底物液,于5～30分鐘內(nèi)測定發(fā)光強(qiáng)度,判斷是否含有梅毒螺旋體特異性抗體[3]。此法對Ⅰ型梅毒的陽性率為93.8%;Ⅱ期梅毒和潛伏梅毒的陽性率為100%,具有敏感性高,特異性強(qiáng)的特點(diǎn),并且全自動免疫分析儀的使用大大提高了檢驗(yàn)質(zhì)量,避免人為因素的影響,不僅提高了工作效率,也提高了梅毒血清學(xué)的陽性率,以便梅毒患者能得到及時(shí)有效的診治。

參考文獻(xiàn)

[1] 謝幸茍文麗.婦產(chǎn)科學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社.2006:18-190.

化學(xué)發(fā)光免疫范文第3篇

【關(guān)鍵詞】促甲狀腺激素（TSH）；化學(xué)發(fā)光免疫分析法；試劑盒

甲狀腺功能改變時(shí)， TSH的波動較甲狀腺激素更迅速且明顯， 是反映下丘腦、垂體、甲狀腺軸功能的敏感指標(biāo)， 因此采用靈敏度高的TSH免疫分析法具有重要的意義?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析（chemiluminescent immunoassay， CLIA）是一種靈敏的免疫分析方法， 在免疫診斷試劑研制中已得到了廣泛的應(yīng)用[3]。本研究根據(jù)化學(xué)發(fā)光免疫分析法的原理研制了血清TSH的檢測試劑盒， 與國內(nèi)外同類產(chǎn)品相比具有簡便、快捷、成本低等優(yōu)點(diǎn)。

1 材料和方法

1.1 材料 TSH單克隆抗體（mAb）、 TSH標(biāo)準(zhǔn)品抗原和辣根過氧化物酶（HRP）為Sigma公司產(chǎn)品， 光免板為Thermo Electron公司產(chǎn)品， 化學(xué)發(fā)光底物為BioRad公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的配制 將TSH抗原標(biāo)定后溶于小牛血清中， 配制成含0.1， 1， 5， 20， 100 mIU/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 抗體包被板的制備 將100μL含TSH mAb（0.5mg/L）的pH9.6碳酸鹽緩沖液加至包被板中， 37℃包被2 h， 再用含10 mg/L BSA的0.01 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液于37℃封閉2 h后晾干備用。

1.2.3 酶標(biāo)記物的制備 TSH的酶標(biāo)記物采用過碘酸鈉法制備， 然后經(jīng)0.01 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液透析過夜后， 加入等量的甘油于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 檢測方法 將50 μL待測樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入包被TSH的光免板中， 37℃溫育30 min， 棄反應(yīng)液， 用洗滌液（含0.5 mg/L Tween20的0.01 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液）洗5次， 加酶標(biāo)記物50 μL， 37℃溫育30 min后同樣用洗滌液洗5次， 然后加入發(fā)光底物于5～10 min內(nèi)測定各孔的發(fā)光值RLU。樣本中的TSH濃度依據(jù)由標(biāo)準(zhǔn)品TSH濃度和對應(yīng)的RLU建立的數(shù)學(xué)模型進(jìn)行定量。

2 結(jié)果

2.1 動力學(xué)性質(zhì) 在HRP魯米諾H2O2發(fā)光體系中， 將不同量的免疫復(fù)合物加入發(fā)光液中， 發(fā)光強(qiáng)度（RLU）隨反應(yīng)時(shí)間而變化。10 min后RLU接近峰值， 在5～15 min內(nèi)RLU較為穩(wěn)定， 隨后開始緩慢下降。

2.2 反應(yīng)條件優(yōu)化

2.2.1 加樣量對RLU的影響 樣本和酶標(biāo)記物的加樣量分別為50μL和100μL考查標(biāo)準(zhǔn)品（0、0.1、1、5、20、100 mIU/L）RLU， 發(fā)現(xiàn)加樣量為100μL與50μL RLU相差不大， 說明50 μL的加樣量反應(yīng)能達(dá)到平衡。

2.2.2 反應(yīng)模式對RLU的影響 采用二步法。第一步： 加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品后， 將反應(yīng)體系在37℃分別溫育15、30、45、60 min； 第二步： 加入酶標(biāo)記抗體后， 將反應(yīng)體系在37℃分別溫育15、30、45、60 min。結(jié)果表明溫育時(shí)間為30 min時(shí)反應(yīng)皆能達(dá)到平衡。

A： 第一步溫育時(shí)間對RLU的影響； B： 第二步溫育時(shí)間對RLU的影響.

2.3 穩(wěn)定性 將試劑盒放置于37℃ 6 d后， 比較與放置前參考標(biāo)準(zhǔn)品各點(diǎn)RLU值， 參考標(biāo)準(zhǔn)品各點(diǎn)RLU值未見明顯降低， 且本底發(fā)光值無明顯升高， 表明試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線無明顯漂移， 滿足穩(wěn)定性要求。

2.4 方法學(xué)評價(jià)

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與靈敏度 在設(shè)定的免疫反應(yīng)和發(fā)光條件下， 以標(biāo)準(zhǔn)血清的濃度（0～100 mIU/L）制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3。同時(shí)測定20個(gè)零標(biāo)準(zhǔn)， 用零標(biāo)準(zhǔn)均值加上2倍標(biāo)準(zhǔn)差， 計(jì)算出此方法的靈敏度為0.0788 mIU/L。

2.4.2 精密度 取低（4.44 mIU/L）、中（19.45 mIU/L）和高（79.23 mIU/L）3種TSH濃度各重復(fù)測定10次， 測定批內(nèi)CV分別為6.2%、3.3%和4.6%，平均為4.7%。隔日分別進(jìn)行5次獨(dú)立試驗(yàn)， 測批間CV分別為8.3%、7.6%和9.3%， 平均為8.4%。

2.4.3 準(zhǔn)確性 在已知TSH濃度的血清中加入3種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)血清，測定加入回收率為93.05%。將TSH濃度為44.42 mIU/L的血清用標(biāo)準(zhǔn)零血清分別按1/2、1/4、1/8、1/16稀釋， 測量各稀釋濃度的TSH含量， 測定稀釋回收率為99.86%。

2.4.4 特異性 在已知濃度的血清樣品中加入不同濃度的LH、FSH和HCG后， 對TSH的測定無干擾。

2.4.5 與進(jìn)口試劑的比較 將研制的TSH CLIA定量檢測試劑盒與Abbott architect i2000全自動化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)共同對30例正常人、20例甲亢及80例甲低臨床標(biāo)本進(jìn)行檢測， 通過數(shù)據(jù)分析， 得出兩個(gè)檢測系統(tǒng)所得數(shù)值具有明顯相關(guān)性。

3 討論

化學(xué)發(fā)光免疫范文第4篇

【關(guān)鍵詞】學(xué)發(fā)光免疫法；臨床檢驗(yàn)；一致性

【中圖分類號】R51 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004-7484（2013）11-0530-02

就當(dāng)前化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）方法的使用情況來看，絕大多數(shù)醫(yī)院常規(guī)所運(yùn)用的一般均包括2種或以上，這就導(dǎo)致了院內(nèi)檢驗(yàn)的結(jié)果其一致性可能存在一定缺陷。為具體了解不同化學(xué)發(fā)光免疫法的臨床檢驗(yàn)一致性水平，就必須將其檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對比?；诖?，筆者特選擇性激素為本研究所檢測的項(xiàng)目，共對3種CLIA系統(tǒng)的檢測結(jié)果一致性實(shí)施了對比研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1樣本來源 在征得同意的情況下選擇筆者所在醫(yī)院門診的50例普通患者，分別采集其靜脈血并分離血清以備檢測所用。

1.2儀器與試劑 Beckman Coulter Access系統(tǒng)、Tosoh AIA 360系統(tǒng)、Snibe Maglumi 2000系統(tǒng)及其各自對應(yīng)的配套校準(zhǔn)品；另外，還有Bio-Rad的定值質(zhì)控品，關(guān)于此品，由于目前各免疫試劑廠家在制造時(shí)所選用的免疫血清有所區(qū)別，故國際上尚未制定有統(tǒng)一的可溯源標(biāo)準(zhǔn)，而Bio-Rad也正是在此種情況下仍獲得國際公認(rèn)的第三方質(zhì)控品，其相關(guān)系統(tǒng)的定值取自世界數(shù)百家大型實(shí)驗(yàn)室的均值，因此幾乎不會受到某些離群數(shù)值的干擾，故本研究將其作為檢測系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證品。

1.3檢測方法 參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）的EP9-A2文件，每天進(jìn)行10個(gè)標(biāo)本的檢測，并對10個(gè)標(biāo)本進(jìn)行標(biāo)號，先按①⑩的順序檢測1次，之后再按⑩①的順序再進(jìn)行1次復(fù)檢，求其平均值，所有樣本共連續(xù)檢測5d完成。

1.4性激素濃度參考范圍 本研究分別對6種性激素進(jìn)行檢測，經(jīng)Access系統(tǒng)分析后，該6中性激素的名稱與濃度范圍分別如下：促濾泡素（FSH）為1.2～145mIU/ml；促黃體素（LH）為3.4～218.7mIU/ml；促乳素（PRL）為1.6～154ng/ml；雌二醇（E2）為2.3～2145pg/ml；黃體酮（PROG）為0.7～38.4ng/ml；睪酮（TESTO）為0.03～15.2ng/ml。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)與一致性判斷方法 對檢測所得數(shù)值進(jìn)行線性回歸以分析其相關(guān)性，將數(shù)據(jù)輸入Excel表后，以XY繪圖并作趨勢線分析，得出每次檢驗(yàn)方法的線性回歸方程與相關(guān)系數(shù)r2值，以兩種檢測方法的相關(guān)系數(shù)r2作為判斷此兩種檢測方法結(jié)果一致性的依據(jù)，具體如下：在EP-9A2文件中規(guī)定r2≥0.95，則可判定其檢測結(jié)果一致；而我國食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評中心又于2011年4月制定并了《體外診斷試劑分析性能評估（準(zhǔn)確度-方法學(xué)比對）指導(dǎo)原則》，該指導(dǎo)原則規(guī)定r2≥0.90即可判定兩檢測方法結(jié)果為一致?；诖耍狙芯考磪⒖家陨蟽蓚€(gè)標(biāo)準(zhǔn)一起來進(jìn)行3個(gè)CLIA系統(tǒng)檢測結(jié)果一致性的判斷。

2 結(jié)果

2.1 3種檢測系統(tǒng)對6種性激素檢測的偏倚

參考我國衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的相關(guān)規(guī)定，其靶值在±25%的范圍均是能被接受的，將偏倚不超出允許誤差的1/2作為校準(zhǔn)驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)范圍。分別選擇用3個(gè)批號（分別為40231、40232、40233）的Bio-Rad定值質(zhì)控品實(shí)施校準(zhǔn)驗(yàn)證，均進(jìn)行3次檢測以取平均值并計(jì)算相對偏倚，計(jì)算公式為：相對偏倚=（靶值-測定均值）/靶值×100%。具體結(jié)果詳見表1。

2.2 3種檢測系統(tǒng)對6種性激素檢測結(jié)果的一致性比較

首先參照EP-9A2文件標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行6項(xiàng)性激素檢測結(jié)果一致性的判斷，具體結(jié)果詳見表2。

3 討論

本研究結(jié)果顯示，采用不同的CLIA系統(tǒng)對性激素進(jìn)行檢測的結(jié)果是存在一定不一致性的。醫(yī)院相關(guān)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室如果常規(guī)采用多種CLIA系統(tǒng)進(jìn)行檢驗(yàn)，那么就必須要求需在對各系統(tǒng)的檢測結(jié)果加以對比分析后才能給出最終的檢驗(yàn)報(bào)告。而對可實(shí)現(xiàn)一致性檢測的項(xiàng)目，則應(yīng)始終貫徹以一種檢測系統(tǒng)為主而以其他檢測系統(tǒng)實(shí)施一致性處理的指導(dǎo)方針，對檢測結(jié)果不能實(shí)現(xiàn)一致性的項(xiàng)目則建議僅采用單一的檢測系統(tǒng)實(shí)施檢測，以最大程度確保臨床檢驗(yàn)結(jié)果的一致性。

參考文獻(xiàn)：

[1] EP9-A2.The National Committee for Clinical Laboratory Standards.Method comparison and bias estimation using patient samples[S].Approved Guideline-Second Edition，NCCLS，1995.

化學(xué)發(fā)光免疫范文第5篇

【關(guān)鍵詞】 乙肝表面抗原；ELISA；化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法；抗體確認(rèn)試驗(yàn)

我國是肝炎大國， 據(jù)2006年的調(diào)查，我國乙肝表面抗原總攜帶率為7.18%[1]， 乙肝的實(shí)驗(yàn)室診斷對于乙肝的診斷治療有著很重要的臨床意義。隨著檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展， 檢驗(yàn)方法更加科學(xué)準(zhǔn)確， 目前酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）是檢驗(yàn)科應(yīng)用最廣的檢測乙肝表面抗原的方法， 本文就兩種方法對乙肝表面抗原檢測進(jìn)行比較， 報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集本院2112年3月～2012 年12月住院檢測乙肝表面抗原患者2686人， 其中男1324， 女1362。

1. 2 試劑與方法 ①酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：試劑由廈門新創(chuàng)科技有限公司提供。嚴(yán)格按說明書要求操作。HBsAg檢測以S/CO>1.0為陽性。②化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）：檢測試劑和抗體中和確認(rèn)試劑以及校準(zhǔn)品均由美國Abbott公司提供?；瘜W(xué)反光反應(yīng)的判讀標(biāo)準(zhǔn)為>0.05 IU/ml為陽性。確認(rèn)試驗(yàn)以抑制率>50%為陽性。儀器為美國Abbott公司生產(chǎn)的i2000化學(xué)發(fā)光分析儀。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析， 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)， P

2 結(jié)果

2. 1 所用標(biāo)準(zhǔn)物由Abbott公司提供， 兩種方法靈敏度見表1。

2. 2 CMIA法所測得113例陽性標(biāo)本， 經(jīng)確認(rèn)試驗(yàn)陽性數(shù)為103例， 確認(rèn)陽性率91.2%。ELISA法陽性率為83.2%。兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

乙肝表面抗原檢測是判斷乙型肝炎病毒感染的重要依據(jù)， 我國是乙肝病毒高發(fā)區(qū)， 準(zhǔn)確、及時(shí)診斷對于乙肝的治療和預(yù)后尤為重要。

對于HBV檢查， 實(shí)驗(yàn)室有多種方法， 最常見的是金標(biāo)法、ELISA法、化學(xué)發(fā)光法。

膠體金法對于急診是一種較好的方法， 其優(yōu)點(diǎn)是速度快， 但是和其他方法相比， 對于弱陽性結(jié)果易造成 漏檢和誤讀。ELISA法是目前最廣泛應(yīng)用的乙肝表面抗原的檢測方法， ELISA法由于操作的影響因素較多， 臨界值附近的樣本易出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果， 易引起誤診或漏診[2]?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)是近二十年來發(fā)展起來的免疫分析技術(shù)， 化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）以其全自動儀器、封閉式操作和配套試劑， 使人為因素減到最低， 該方法以其很好的特異性、較高的靈敏度和重復(fù)性被譽(yù)為當(dāng)今免疫檢測的金標(biāo)準(zhǔn)[3]。

本研究中， 以HBsAg確認(rèn)試驗(yàn)為判斷標(biāo)準(zhǔn)， 113例微粒子化學(xué)發(fā)光結(jié)果中， 103例HbsAg確認(rèn)為陽性， 陽性率91.2%， 其中ELISA法敏感性為88.3%（91/103）， 特異性為70.0%（7/10）， ELISA法有較大比例的誤診和漏診。有人建議對于對于初篩弱陽性的檢驗(yàn)標(biāo)本， 需要做確認(rèn)試驗(yàn)這樣才能盡可能避免結(jié)果的誤報(bào)、漏報(bào)， 為臨床診斷提供更好的服務(wù)[4]。

化學(xué)反光反應(yīng)的判讀標(biāo)準(zhǔn)為>0.05 IU/ml為陽性， 從表1看化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法測定 HBsAg靈敏度比較， 其靈敏性度遠(yuǎn)高于ELISA方法。本試驗(yàn)CMIA陽性的113例標(biāo)本中 ， 經(jīng)抗體中和確認(rèn)試驗(yàn)后103例陽性，假陽性結(jié)果10例， 假陽性率為8.85%（10/113）， 這10例標(biāo)本表面抗原值在0.05～0.12 IU/ml之間， 提示我們對于弱陽性結(jié)果需要做確認(rèn)試驗(yàn)以保證試驗(yàn)正確性。李金明[5] 也提出由于灰區(qū)的存在， 有必要對采用免疫測定， 如 ELISA， 免疫化學(xué)發(fā)光、免疫膠體金試劑條等初篩方法檢測反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)， 但由于確認(rèn)試驗(yàn)試劑目前絕大部分還是依賴進(jìn)口， 價(jià)格昂貴， 因此可考慮只對弱陽性反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行確認(rèn)。

參考文獻(xiàn)

[1] 衛(wèi)生部. 全國人群乙肝血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果.我國乙肝免疫預(yù)防工作取得顯著成績， 2008， 4： 21.

[2] 王克波，楊波，楊志俊.ELISA試驗(yàn)的質(zhì)量控制.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志， 2005，15（1）：112.

[3] 劉冀瓏，喬惠理，鄧澤沛.化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù).化學(xué)通報(bào)， 2000， 7：49-53.