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求學(xué)路上范文第1篇

我喜歡淡淡的燭光，微微的炭香和細(xì)膩溫馨的雨季，因?yàn)樗鼈兛偸亲屛也豢梢种频南爰?，想母親。

從我記事起，父親便一直長(zhǎng)年漂泊在外，為生活而奔波忙碌。于是母親便成了我幸福的港灣。忘不了，那個(gè)在淡淡的煤油燈下為我縫衣至深夜的人是母親；那個(gè)把叮嚀縫進(jìn)鞋墊，把牽掛裝進(jìn)行囊，把所有關(guān)愛寫在心底的人是母親；那個(gè)在孩子面前不輕易流淚，困難面前不低頭的人是母親；那個(gè)最偉大而又最平凡的女人是我的母親。母親從不舍得打我，她說：“娃是娘身上掉下的肉，打了，疼；罵了，痛。”

一直在母愛的溫柔中行走。高考落榜的那些日子，一直想逃離母親的目光，逃出這份浩瀚的愛之海。所以偷偷打好行李，執(zhí)拗要去獨(dú)闖西北。母親拗不過我，在一個(gè)淅淅瀝瀝的雨后，母親撐一把雨傘，撐一個(gè)叮嚀，無語地送我上了西去的火車。至今仍記得當(dāng)時(shí)雨中那瘦小單薄的身影，在那樣的雨季，把母親的思念拉得悠長(zhǎng)悠長(zhǎng)。

列車駛過熟悉的村莊和田野時(shí)，心里還沒什么，總覺得身上輕松了許多，等列車開進(jìn)內(nèi)蒙、寧夏時(shí)，滿車陌生的人和聽不懂的方言告訴我已經(jīng)離家很遠(yuǎn)了。窗外，一條大河流過，河畔有草甸，一匹小馬依偎在大馬身邊吃草，大馬不時(shí)的用嘴輕咬小馬的脖頸……列車駛遠(yuǎn)了，我還在扭頭看著，想起了母親，想起了那雖清貧卻溫暖的家。隨著列車的遠(yuǎn)去，我落了一路的眼淚,那年我剛剛十八歲。

到了城市才知道這個(gè)世界的艱難。我先在商場(chǎng)找了一份送貨的工作，每天送三十箱酒，三十箱礦泉水，自己裝自己卸，一個(gè)月才三百塊錢，住在臨時(shí)租的一個(gè)四季透風(fēng)的屋里。每天起早貪黑，勤勤懇懇，但最后還是被開除了，原因是我被懷疑偷了商場(chǎng)的東西。當(dāng)時(shí)想到自己這些天吃的苦、受的累……很委屈很無奈地哭了。離開商場(chǎng)，我又來到一處建筑工地，每天拼命地干活，哪怕再苦再累。一天下來，整個(gè)身體像散了架似的，渾身酸痛，但我無怨無悔，只想讓身體的酸痛淹沒落榜的心痛，逃離母親那充滿憐愛的目光。

同樣是在一個(gè)有雨的午后，我在工棚里邊啃饅頭邊看電視，那是倪萍主持的一次談話節(jié)目，請(qǐng)來了季羨林先生。當(dāng)談到季老的母親時(shí)，倪萍讓濮存昕誦讀了季老《永久的悔》中的一段：我無論如何也回憶不起母親的笑容來了，她好像一輩子沒有笑過。家境貧寒，兒子遠(yuǎn)離，讓她受盡了苦難，笑容從何而來呢？我曾經(jīng)暗暗立下誓愿，一旦大學(xué)畢業(yè)，自己找到工作，立即贍養(yǎng)母親。然而沒有等到我大學(xué)畢業(yè)，母親就離開我走了，永遠(yuǎn)，永遠(yuǎn)地走了。古人說：樹欲靜而風(fēng)不止，子欲養(yǎng)而親不待……世界上無論什么名譽(yù)，什么地位，什么幸福都比不上待在母親身邊，這就是我永久的悔。誦讀之中，淚水不斷從年過九旬的季老眼中滑落，而我也早已哭成了淚人，嘴中早已嚼爛的饅頭久久難以下咽。我知道，母親在等我，在村口的大樹下念叨著兒子早日回家，她不相信她心愛的兒子這樣容易被打倒。

那一夜，想著打工的艱辛，想著母親擔(dān)憂的目光，想到自己今后漫漫人生路，久久無法入睡，枕巾濕了一片……是啊，一直以為自己早已成熟得足夠遮風(fēng)擋雨，所以總是不能理解母親那份“嘮叨”，笑她嗦。終于等到能懂之時(shí)，一種心痛已在心頭：母親是在日復(fù)一日的眷戀中蒼老下去的??！自己可以離開母親走得很遠(yuǎn)很遠(yuǎn)，但永遠(yuǎn)也走不出母親心靈的廣場(chǎng)。

第二天，我毅然踏上了回家的列車……

當(dāng)疲憊不堪的我拎著一個(gè)洗得發(fā)黃的破書包帶著一臉的歉意來到母親面前，面對(duì)母親滿眼的擔(dān)憂與淚花時(shí)，一句“回來就好”讓我所有的歉意凝為淚滴落了下來。等到了明日，一聲“再見”讓面對(duì)門檻，背對(duì)母親，準(zhǔn)備復(fù)讀的我不忍回頭，知道回過頭來必定是一份刻骨銘心的悵然與心酸。

在復(fù)讀的日子里，我把淚水釀成一杯苦酒，偷偷吞落。為了母親，再苦再累，我也心甘情愿。白天，躲在教室里拼命地學(xué)，晚上，挑燈夜讀至深夜。對(duì)我來說，好象永遠(yuǎn)沒有休息的時(shí)間，每天大腦里裝的不是數(shù)學(xué)公式就是英文單詞。就這樣我繼續(xù)努力著，也繼續(xù)進(jìn)步著：在班上排到20名、15名、8名、3名……每當(dāng)深夜困了、累了的時(shí)候，看著窗外的點(diǎn)點(diǎn)繁星，我仿佛又看到了母親那充滿憐愛的目光。我堅(jiān)信我會(huì)成功，一定會(huì)的！

終于“皇天不負(fù)有心人”，一年以后我以超出重點(diǎn)線60分的優(yōu)異成績(jī)順利的被北方一所著名大學(xué)――哈爾濱工業(yè)大學(xué)錄取。當(dāng)我手捧沉甸甸的大紅通知書給母親看時(shí)，母子二人相擁而泣，許久、許久……

求學(xué)路上范文第2篇

“廣泛閱讀各種類型的讀物，課外閱讀總量不少于260萬字，每學(xué)年閱讀兩三部名著。”……讀著《語文課程標(biāo)準(zhǔn)》， 作為一名小學(xué)語文教師的我不止一次地陷入沉思：看看我的孩子們：周一到周五的課業(yè)負(fù)擔(dān)本來就不輕，周末更是奔走于各種興趣班之間，讓他們拿什么時(shí)間來讀課外書呢？過重的課內(nèi)外負(fù)擔(dān)，過多的“細(xì)讀文本”，剝奪了孩子們閱讀的時(shí)間，扼殺了孩子們的閱讀興趣和閱讀自由，使我對(duì)以上《標(biāo)準(zhǔn)》的實(shí)行不敢樂觀。我開始懷疑與審視這套所謂“神圣不可侵犯”的教材：難道一冊(cè)區(qū)區(qū)幾萬字的小學(xué)語文課本，就要耗去學(xué)生半年的學(xué)習(xí)時(shí)間與生命？難道這浩如煙海的優(yōu)秀書籍，就不能在課堂上讓孩子一睹為快？于是，我開始了嘗試——我要和孩子們共同探尋一條學(xué)習(xí)語文的幸福之路！

二、尋找語文學(xué)習(xí)幸福之路

1.雛形：三節(jié)課上完一個(gè)單元

當(dāng)我感到困惑的時(shí)候，廣西教研部的陸云主任作為桂林市秀峰區(qū)“教師培訓(xùn)梯隊(duì)工程”的導(dǎo)師，親自來到學(xué)校指導(dǎo)我們。我把自己的想法告訴了陸云主任，他毫無保留地把自己用三課時(shí)讓學(xué)生自主學(xué)完一個(gè)單元，然后把爭(zhēng)取出的來時(shí)間組織學(xué)生開展海量課外閱讀的方法介紹給了我。

當(dāng)時(shí)的我如獲至寶，第二天就在班上進(jìn)行了嘗試：我把全班學(xué)生分成了12個(gè)小組。學(xué)習(xí)一個(gè)單元的第一課時(shí)，我給學(xué)生布置涵蓋一個(gè)單元所有知識(shí)點(diǎn)的學(xué)習(xí)任務(wù)，讓學(xué)生借助課本等在小組內(nèi)進(jìn)行自學(xué)，并告訴學(xué)生這就是第二節(jié)課要測(cè)試的內(nèi)容。第二課時(shí)，我們以組為單位，針對(duì)第一節(jié)課自學(xué)的內(nèi)容進(jìn)行測(cè)試。第三課時(shí)，針對(duì)學(xué)生在測(cè)試中掌握得不好的知識(shí)點(diǎn)進(jìn)行講評(píng)，并根據(jù)四人小組的共同表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)分中，表現(xiàn)好的組可以獲得到閱覽室看書的獎(jiǎng)勵(lì)。

過去學(xué)生不知道老師要考什么，只是被動(dòng)學(xué)習(xí)，而現(xiàn)在，老師告訴他們自學(xué)的內(nèi)容就是第二天考試的內(nèi)容，學(xué)得特別主動(dòng)，平時(shí)7至8課時(shí)才能學(xué)完的一個(gè)單元的內(nèi)容，三個(gè)課時(shí)就學(xué)完了，而節(jié)約出來的時(shí)間則可以讓學(xué)生讀課外書，也因此學(xué)生的積極性特別高。然而讓我困惑的是，我給學(xué)生提出的自學(xué)任務(wù)除了包括本單元里必須掌握的字、詞等基礎(chǔ)知識(shí)外，對(duì)課文的學(xué)習(xí)，到底應(yīng)該要求學(xué)生掌握到什么程度我還是拿捏不準(zhǔn)。

2.一改：“大道至簡(jiǎn)”的語文課

帶著這個(gè)疑問摸索著進(jìn)行了近兩個(gè)月，我得到了到參加s版教材培訓(xùn)的機(jī)會(huì)。培訓(xùn)中，一位專家說了這么一句話：語文課——“大道至簡(jiǎn)”，只需要讓學(xué)生兩個(gè)明白兩個(gè)問題：課文告訴了我們什么，我想到了什么，老師就功德圓滿了。當(dāng)時(shí)聽到這句話，我深以為然，是啊，就像青年名師薛瑞萍說的那樣：語文是一艘船，應(yīng)該讓他載著我們駛向更為廣闊的大海，而不是領(lǐng)著學(xué)生到處摸哪里有幾顆螺絲。如果我把語文課的時(shí)間花在讓學(xué)生分析詞語，深挖句意、中心思想上，他們就永遠(yuǎn)失去了與圣人為伍，與經(jīng)典同行的機(jī)會(huì)。于是，我回校后立刻刪繁就簡(jiǎn)，于是，當(dāng)時(shí)我們班的課文學(xué)習(xí)，只要求掌握這兩個(gè)問題。

3.二改：“鯨吞牛食”學(xué)教材

在不斷查閱相關(guān)資料改進(jìn)自己教學(xué)方法的過程中，我幸逢“海量閱讀”和韓興娥。我才發(fā)現(xiàn)，對(duì)于如何提高課堂效率引導(dǎo)學(xué)生大量閱讀，韓老師等不少的先行者已經(jīng)做了大量研究。韓老師認(rèn)為語文學(xué)習(xí)應(yīng)該“鯨吞牛食”：讓孩子消化一點(diǎn)再閱讀一點(diǎn)，會(huì)嚴(yán)重阻礙孩子的學(xué)習(xí)進(jìn)程，就像讓牛和鯨魚細(xì)嚼慢咽的結(jié)果，只能讓它們餓死。教師要做的是把大量思想、文字俱佳的文章放在學(xué)生面前，為他們吞食提供條件，文章的“深度理解”要等以后學(xué)生在大量閱讀中慢慢“反芻”， 隨著大量的閱讀，總有豁然開朗的那一天 。

從韓興娥那里，我主要借鑒了兩個(gè)做法：第一、刪去對(duì)課文條分縷析的做法，直奔中心提出能涵蓋主要知識(shí)點(diǎn)的問題。二是，她認(rèn)為識(shí)字是為大量閱讀服務(wù)的，一改過去傳統(tǒng)教學(xué)中字不離詞、詞不離句、在課文中慢慢識(shí)字的做法，一年級(jí)集中讓學(xué)生認(rèn)識(shí)2500個(gè)漢字，為大量閱讀夯實(shí)基礎(chǔ)。所以，我也把一個(gè)單元的識(shí)字課單列出來，在課前進(jìn)行集識(shí)字，以幫助閱讀。

4.三改：“生本教育”的小組建設(shè)和前置作業(yè)

在接下來的時(shí)間里，我又有幸參加了郭思樂教授“生本教育”的學(xué)習(xí)。“生本”的課堂給了我強(qiáng)烈的沖擊。根據(jù)“生本”的理念，我改進(jìn)了小組的建設(shè)：我讓學(xué)生自由選擇自己喜歡的朋友組成學(xué)習(xí)小組，小組內(nèi)學(xué)習(xí)好的學(xué)生和學(xué)習(xí)弱的學(xué)生結(jié)為師徒。整個(gè)小組的成績(jī)實(shí)行捆綁制，小組的成績(jī)即個(gè)人的成績(jī)，促進(jìn)每個(gè)學(xué)生都積極地加入到學(xué)習(xí)中來。同時(shí)，我引入了“生本教育”中布置前置作業(yè)，先學(xué)后教的做法。

5.成形：?jiǎn)卧稀⑺恼n漸進(jìn)、海量閱讀

我在自己班級(jí)這一畝三分地上摸索實(shí)驗(yàn)了半年，然而，到底怎樣通過單元整合提高課堂的有效性仍是我的疑問。于是，我常常通過電話、網(wǎng)絡(luò)向陸云主任請(qǐng)教。陸主任看了我的教案后向我指出：?jiǎn)卧系谝皇且峭怀鰡卧?xùn)練重點(diǎn)（不僅僅是課文內(nèi)容方面，更重要的是語文能力方面在大的框架下如何突出年段特點(diǎn)，落實(shí)能力訓(xùn)練。）其二，要注意遷移運(yùn)用。一課學(xué)方法，兩課做運(yùn)用，以一課帶多課。通過這樣的訓(xùn)練點(diǎn)和系列訓(xùn)練過程，學(xué)生能力就會(huì)大大提高，什么考試都不怕。聽到這些，我頓覺醍醐灌頂，霍然開朗——單元整合、四課漸進(jìn)、海量閱讀教學(xué)法，在我的心中初步成形。

三、單元整合、四課漸進(jìn)、海量閱讀教學(xué)法

“單元整合、四課漸進(jìn)、海量閱讀”這一教學(xué)方法是在整合整個(gè)單元教材的基礎(chǔ)上，通過四個(gè)循序漸進(jìn)的課型來完成一單元教學(xué)。這四課型為：生字過關(guān)課、課文誦讀課、課文領(lǐng)悟課、因材施教講評(píng)課。用此教學(xué)法，一單元過去要用7-8課時(shí)才能學(xué)完的課文用4——5課時(shí)即可完成。讓學(xué)生在很短的時(shí)間內(nèi)學(xué)完教材內(nèi)容，單元整合，四課漸進(jìn)，重點(diǎn)突出。這樣不僅培養(yǎng)了學(xué)生自學(xué)的能力，而且節(jié)約出大量時(shí)間，讓學(xué)生在課堂上進(jìn)行大量閱讀，通過閱讀，有效提升學(xué)生的語文素養(yǎng)。在學(xué)生通過上述課型完成整個(gè)單元的教材內(nèi)容之后，我和學(xué)生們便進(jìn)入了海量課外閱讀的自由天地。

因?yàn)檎n堂上擠出了閱讀時(shí)間，孩子們的閱讀量成倍增加，大量的閱讀好比一條船，將聽、說、讀、寫載于其中，載著我和孩子一齊駛向彼岸，識(shí)字問題、作文問題、理解問題等也都迎刃而解。教學(xué)之路，上下求索，我和我的學(xué)生們終于通過“單元整合，四課漸進(jìn)，海量閱讀”，找到了一條充滿快樂的語文學(xué)習(xí)幸福之路。

求學(xué)路上范文第3篇

第1章：有理數(shù) 。

第2章：一元一次方程 。

第3章：圖形認(rèn)識(shí)初步。

第4章：數(shù)據(jù)的收集與整理。

七年級(jí)下冊(cè)

第5章：相交線與平行線。

第6章：平面直角坐標(biāo)系。

第7章：三角形。

第8章：二元一次方程組。

第9章：不等式與不等式組。

求學(xué)路上范文第4篇

著名魯迅研究專家學(xué)者王錫榮日前在接受本報(bào)記者專訪時(shí)透露，他最近在參與國(guó)家社科基金重大課題“《魯迅手稿全集》文獻(xiàn)整理與研究”時(shí)發(fā)現(xiàn)大文豪魯迅其實(shí)也非常關(guān)注和熱愛自然科學(xué)。魯迅一生都在從事科學(xué)啟蒙工作，希望通過介紹科學(xué)知識(shí)，啟發(fā)國(guó)人正確認(rèn)識(shí)世界、認(rèn)知自己。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，魯迅寫過和翻譯過的科學(xué)論著不下數(shù)十種，涉及化學(xué)、物理學(xué)、地質(zhì)學(xué)、生物學(xué)等諸多領(lǐng)域。

據(jù)王錫榮介紹，還在童年時(shí)期，魯迅就喜愛有關(guān)草木蟲魚的自然科學(xué)讀物；而系統(tǒng)地接觸自然科學(xué)知識(shí)，則是在進(jìn)入南京的水師學(xué)堂和路礦學(xué)堂之后。在學(xué)堂里，他知道“世上還有所謂格致、算學(xué)、地理、歷史、繪圖和體操”；感到“非常新鮮”。據(jù)記載，那時(shí)候中國(guó)已經(jīng)引進(jìn)介紹了達(dá)爾文的《天演論》，魯迅特地在假日趕到城南買回來，如饑似渴地學(xué)習(xí)。直到很多年以后，魯迅依然能背誦它的一些段落。

除了自己努力學(xué)習(xí)自然科學(xué)知識(shí)，魯迅總是及時(shí)地把世界上最新的重要科學(xué)研究成果介紹給國(guó)人。1902年，魯迅前往日本留學(xué)，第二年便根據(jù)日文譯本轉(zhuǎn)譯了法國(guó)作家儒勒?凡爾納的兩部科學(xué)小說《月界旅行》和《地底旅行》。這一時(shí)期，魯迅還親自寫了一些自然科學(xué)方面的著作。而有感于中國(guó)礦產(chǎn)豐富、國(guó)人卻知之有限，魯迅與同窗顧瑯合作編著了《中國(guó)礦產(chǎn)志》。該書詳盡地介紹了中國(guó)18個(gè)省份的礦產(chǎn)資源及分布情況，另附錄《中國(guó)礦產(chǎn)全圖》，書后有《中國(guó)各省礦產(chǎn)一覽表》。這本書不僅讓當(dāng)時(shí)的國(guó)人了解了祖國(guó)的富饒礦產(chǎn)，同時(shí)也呼吁同胞們抵御列強(qiáng)對(duì)國(guó)家資源的覬覦和掠奪?！吨袊?guó)礦產(chǎn)志》出版后，被當(dāng)時(shí)的教育部門推薦為“國(guó)民必讀書”和“中學(xué)堂參考書”。至1912年10月，6年間再版了4次。

魯迅十分重視用先進(jìn)的科學(xué)知識(shí)啟迪學(xué)生，把它作為“立人之要”。1909年，中國(guó)還處在清朝末年，他就在浙江兩級(jí)師范學(xué)堂開設(shè)《化學(xué)》與《生理衛(wèi)生》課程。學(xué)堂沒有教材，他就自己編?，F(xiàn)尚保存完好的《生理學(xué)講義》長(zhǎng)達(dá)兒萬字，共248頁，內(nèi)容主要包括生理學(xué)、解剖學(xué)和衛(wèi)生保健的知識(shí)。講義中還附有魯迅自繪的插圖72幅，附表5個(gè)，末附14項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，是我國(guó)近代最早的生理衛(wèi)生學(xué)講義之一。

王錫榮透露，魯迅教生理學(xué)時(shí)，曾應(yīng)學(xué)生的要求，加講生殖系統(tǒng)的內(nèi)容，這在當(dāng)時(shí)簡(jiǎn)直不可思議，魯迅卻很坦然。上課前，他對(duì)學(xué)生提出一個(gè)要求：就是在他講授的時(shí)候，不許笑。他曾對(duì)同事說：“在這些時(shí)候，‘不許笑’是個(gè)重要條件。因?yàn)橹v的人態(tài)度是嚴(yán)肅的，如果有人笑，嚴(yán)肅的空氣就破壞了?！?/p>

求學(xué)路上范文第5篇

【關(guān)鍵詞】 ，甲硫氨酸

Effect of homocysteine on expressions of NFκB and protooncogene in ballooninjured rat carotid arteries

【Abstract】 AIM: To study the effect of homocysteine (Hcy) on the expressions of nuclear factorκB (NFκB) P65 protein and cfos， cjun mRNA in common carotid artery of rats after balloon injury and to explore the possible mechanism by which homocysteine exacerbates neointimal hyperplasia after angioplasty. METHODS: The expressions of NFκB P65 protein and cfos and cjun mRNA were detected by Western blot and semiquantitative RTPCR respectively in the common carotid artery. RESULTS: The expressions of NFκB P65 protein and cfos and cjun mRNA were significantly higher in low methionine (LM) group（1.12±0.13， 1.40±0.21， 1.43±0.25）（P

【Keywords】 methionine; homocysteine; balloon injury; NFkappaB; protooncogenes

【摘要】 目的： 觀察高蛋氨酸飲食誘導(dǎo)的高同型半胱氨酸血癥對(duì)大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后血管組織NFκBP65蛋白和原癌基因cfos及cjun mRNA表達(dá)的影響，探討同型半胱氨酸在血管球囊損傷后新內(nèi)膜過度增生中的可能機(jī)制. 方法： 采用Western blot及RTPCR方法分別檢測(cè)血管組織NFκBP65蛋白和cfos及cjun mRNA表達(dá)，并做半定量分析. 結(jié)果： 低、高蛋氨酸組血管組織NFκBP65蛋白、cfos及cjun mRNA的表達(dá)均高于對(duì)照組，分別為1.12±0.13 vs 0.64±0.06 （P

【關(guān)鍵詞】 甲硫氨酸；同型半胱氨酸；球囊損傷；原癌基因；NFκB

0引言

實(shí)驗(yàn)研究和臨床觀察表明，血中同型半胱氨酸(homocysteine， Hcy)升高可引起動(dòng)脈粥樣硬化和血栓形成［1-2］. 然而其在血管內(nèi)皮球囊損傷后新內(nèi)膜增生中的作用及其機(jī)制尚不清楚. 我們用高蛋氨酸（methionine）飲食誘導(dǎo)高同型半胱氨酸血癥，觀察其對(duì)血管內(nèi)皮球囊損傷后血管組織NFκB P65蛋白及原癌基因表達(dá)的影響，以探討Hcy促進(jìn)血管內(nèi)皮球囊損傷后新內(nèi)膜過度增生的可能機(jī)制.

1材料和方法

1.1材料

健康雄性12 wk SD大鼠30只(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供)，體質(zhì)量280~320 g，隨機(jī)分為對(duì)照組（C）(給普通飼料)，低蛋氨酸組(LM)(含蛋氨酸12 g/kg飲食)，高蛋氨酸組(HM)（含蛋氨酸20 g/kg飲食），每組10只，各組均自由進(jìn)食. 蛋氨酸(北京中山生物技術(shù)有限公司，化學(xué)純，批號(hào)： 1903001)，總RNA提取試劑(Trizol)及逆轉(zhuǎn)錄試劑盒為Giblo公司產(chǎn)品，TaqDNA聚合酶cfos， cjun及內(nèi)參βactin上、下游引物為TaKaRa大連寶生物工程有限公司產(chǎn)品；兔抗大鼠NFκB P65多克隆抗體、Western blot檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自武漢博士德公司. 自制2F球囊導(dǎo)管購(gòu)自天津乳膠制品廠；PCR擴(kuò)增儀(美國(guó)MJPC150公司)，圖像分析儀為上海四星公司產(chǎn)品. 高效液相色譜儀(美國(guó)water公司).

1.2方法

1.2.1動(dòng)物模型建立及標(biāo)本采集動(dòng)物喂養(yǎng)4 wk后，體質(zhì)量(350~400) g，禁食12 h，用30 g/L戊巴比妥鈉注射麻醉(30 mg/kg， ip). 沿頸前正中線切開皮膚，在頸前三角區(qū)暴露左右頸內(nèi)、外及頸總動(dòng)脈，結(jié)扎左頸外動(dòng)脈的遠(yuǎn)心端，用微動(dòng)脈夾夾住左頸總動(dòng)脈的近心端及左頸內(nèi)動(dòng)脈，切開左頸外動(dòng)脈的近心端，然后將自制2F球囊導(dǎo)管自頸外動(dòng)脈的近心端插入頸總動(dòng)脈至起始部，球囊注入生理鹽水，使其充分?jǐn)U張致有輕度阻力感，然后回拉球囊使球囊達(dá)頸動(dòng)脈分叉處，重復(fù)3次，完成后負(fù)壓回抽球囊中的生理鹽水，取出球囊導(dǎo)管，結(jié)扎左頸外動(dòng)脈. 以右側(cè)頸總動(dòng)脈作為正常對(duì)照，只分離血管但不做球囊損傷. 術(shù)后1 h，每只動(dòng)物心臟采血2 mL，立即3000 r/min離心15 min，-20℃凍存待測(cè). 然后脊椎脫臼法處死動(dòng)物，并立即取左右頸總動(dòng)脈液氮凍存?zhèn)溆?

1.2.2血漿同型半胱氨酸及蛋氨酸測(cè)定每只動(dòng)物采血2 mL，置于20 g/L EDTANa2的試管中，混勻，30 min內(nèi)，標(biāo)本于4℃用3000 r/min離心15 min，分離出的血漿移入相應(yīng)的EP管，-20℃凍存，留做血漿Hcy和蛋氨酸檢測(cè)，血漿Hcy檢測(cè)按文獻(xiàn)［3］的方法稍作改良，采用高效液相色譜儀測(cè)定血漿Hcy水平，所用試劑批內(nèi)變異系數(shù)

1.2.3Western blot法檢測(cè)血管組織NFκBP65蛋白的表達(dá)參照博士德公司提供的蛋白提取方法，用緩沖液裂解頸總動(dòng)脈組織得到組織總蛋白. 以牛血清蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)蛋白定量試劑盒的說明繪制蛋白定量標(biāo)準(zhǔn)曲線，于紫外分光光度計(jì)750 nm下測(cè)光密度A值，計(jì)算蛋白提取液的濃度. 將優(yōu)化表達(dá)的NFκB P65蛋白用100 g/L聚丙烯凝膠電泳分離后電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，封閉后，先加兔抗鼠NFκB（P65）多克隆抗體（1∶500），再加辣根過氧化物酶結(jié)合的驢抗兔多克隆抗體(1∶500)，用化學(xué)發(fā)光法顯影，用圖像分析系統(tǒng)測(cè)定吸光光度值，NFκB P65蛋白的表達(dá)量以光密度的相對(duì)比值表示.

1.2.4cfos， cjun mRNA表達(dá)的檢測(cè)① 引物序列如下： cfos上游： 5′TCCCAGAGGAGATGTCTGTG3′，下游： 5′GGCTCCAGCTCTGTGACCAT3′，擴(kuò)增片段331 bp. Cjun上游： 5′GCCTGCACAGTGAGCCTCCG3′下游： 5′AGTTGGCACCCACTGTTAAC3′ 擴(kuò)增片段490 bp. βactin上游： 5′CCTAAGGCCAACCGTAAAG3′下游: 5′TCTTCATGGTGCTAGGAGCCA3′，擴(kuò)增片段623 bp. ② 總RNA抽提和cDNA第一鏈的合成： 用Trizol試劑抽提左右頸總動(dòng)脈組織總RNA，各RNA樣本A260 nm/A280 nm的比值均在1.8~2.0之間，用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA第一鏈. ③ PCR反應(yīng)條件： 目標(biāo)基因反應(yīng)條件如下，94℃預(yù)變性2 min，進(jìn)入PCR循環(huán)： 94℃ 30 s， 55℃ 30 s， 72℃ 40 s，共35個(gè)循環(huán)，結(jié)束前72℃延伸7 min;內(nèi)參反應(yīng)條件： 94℃預(yù)變性2 min， 94℃ 20 s， 62℃ 30 s， 72℃ 30 s;共28個(gè)循環(huán)，結(jié)束前72℃延伸7 min. ④ PCR產(chǎn)物經(jīng)20 g/L瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，用生物凝膠電泳圖象分析系統(tǒng)對(duì)電泳條帶進(jìn)行灰度積分，并以βactin校正.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 所有數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用方差分析和SNKq檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)處理用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件，P

蛋氨酸組血漿蛋氨酸和同型半胱氨酸濃度均顯著高于對(duì)照組(P

3討論

我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明短期給予高蛋氨酸飲食，不僅可以引起高蛋氨酸血癥，而且可引起高Hcy血癥. Hcy在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用已得到大量文獻(xiàn)資料的認(rèn)可；最近研究發(fā)現(xiàn)高Hcy血癥加重了球囊損傷大鼠頸動(dòng)脈新內(nèi)膜的增生［4］，但其在血管內(nèi)皮球囊損傷后新內(nèi)膜過度增生中的具體機(jī)制，目前尚不清楚.

研究表明，血管內(nèi)皮球囊損傷后的早期，血管壁組織原癌基因cfos及cjun的表達(dá)即明顯上調(diào)［5］，在1 h左右達(dá)高峰. 我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在血管內(nèi)皮球囊損傷后1 h處死動(dòng)物，在對(duì)照、低蛋氨酸及高蛋氨酸組cfos， cjun mRNA的表達(dá)均明顯高于右側(cè)頸總動(dòng)脈，右側(cè)頸總動(dòng)脈僅有微弱表達(dá)，且發(fā)現(xiàn)其表達(dá)與Hcy呈濃度依賴關(guān)系， 說明Hcy對(duì)cfos及cjun的表達(dá)有激發(fā)作用. 原癌基因cfos及cjun的表達(dá)產(chǎn)物活化后可形成活性蛋白－1(Activation protein1， AP1)，是細(xì)胞核內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因子，可激活細(xì)胞核DNA轉(zhuǎn)錄和核蛋白的合成，參與調(diào)控細(xì)胞增殖分化和轉(zhuǎn)化等重要生物學(xué)行為［6］，使血管平滑肌細(xì)胞可進(jìn)入增殖周期并發(fā)生功能變化，由收縮型轉(zhuǎn)變成活成型. 此外，原癌基因cfos及cjun的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物還可介導(dǎo)多種細(xì)胞因子，尤其是生長(zhǎng)因子的表達(dá). 這就啟動(dòng)了損傷血管局部平滑肌細(xì)胞活化的自分泌、旁分泌機(jī)制，損傷動(dòng)脈局部將有持續(xù)的血管平滑肌細(xì)胞過度增殖和分化，從而有利于血管內(nèi)皮球囊損傷后新內(nèi)膜的過度增生而造成再狹窄.

本實(shí)驗(yàn)涉及的NFκB P65是NFκB家族/Rel家族的重要組成成員之一，目前研究顯示，在細(xì)胞中最常見的形式為P65及P50組成的NF－κB異二聚體，正常情況下與其抑制物IκBα結(jié)合，存在于正常細(xì)胞的的胞質(zhì)內(nèi)，多種刺激信號(hào)，如細(xì)胞因子、氧自由基、細(xì)菌和病毒產(chǎn)物等可以引起IκBα的磷酸化和降解，NFκB脫離NFκB: IκBα復(fù)合體，迅速移位于核內(nèi)，與特定的基因啟動(dòng)子區(qū)的κB結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，誘導(dǎo)基因的表達(dá)［7］，如細(xì)胞因子、原癌基因、黏附分子等. 我們的實(shí)驗(yàn)比較了NFκB P65蛋白在低高蛋氨酸組和對(duì)照組大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后血管組織中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)低、高蛋氨酸兩組的表達(dá)與對(duì)照組有明顯差異（P

Wang等［8］近期研究發(fā)現(xiàn)，Hcy可刺激血管平滑肌細(xì)胞NFκB的激活，從而使平滑肌細(xì)胞表達(dá)和釋放單核細(xì)胞趨化因子，也支持我們的研究. 但關(guān)于Hcy誘導(dǎo)NFκB活化進(jìn)而誘導(dǎo)原癌基因表達(dá)的胞內(nèi)信號(hào)機(jī)制十分復(fù)雜，有待于今后進(jìn)一步闡明.

【參考文獻(xiàn)】

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［4］ 徐會(huì)圃，馮義柏. 高同型半胱氨酸血癥對(duì)大鼠頸動(dòng)脈損傷后新內(nèi)膜增生的影響［J］. 中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2004，19（2）:115-117.

［5］ Miano JM， Vlasic N， Tota RR， et al. Smooth muscle cell immediateearly gene and growth factor activation follows vascular injury ［J］. Arterioscler Thromb， 1993，13(2):211-219.

［6］ Karin M. The regulation of AP1 activity by mitogen activated protein kinases ［J］. J Biol Chem， 1995，270(28):16483-16486.

［7］ Zhu J， Mix E， Olsson T， et al. Cellular mRNA expression of interferongamma，IL4 and transforming growth factorbeta (TGFβ) by rat mononuclear cells stimulated