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化學(xué)發(fā)光范文第1篇

1 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)的研究歷史背景

免疫分析的發(fā)展伴隨著抗體制備技術(shù)的改進(jìn)而不斷提高。美國(guó)科學(xué)家Yalow等人首先將標(biāo)記技術(shù)引入免疫分析，他們首先用放射免疫分析法(RIA)進(jìn)行測(cè)定胰島素。由于這種試驗(yàn)方法限制了試劑的壽命，難以獲得長(zhǎng)期穩(wěn)定的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)由于存在同位素的使用，不僅會(huì)損害操作人員身體健康，也會(huì)帶來(lái)污物處理困難的問(wèn)題。為了找到更為合理的免疫分析法成為以后20年來(lái)研究的熱點(diǎn)。直到70年代末，國(guó)外有學(xué)者將免疫反應(yīng)與化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)相結(jié)合，這種集高靈敏度和高特異性的技術(shù)稱之為化學(xué)發(fā)光免疫分析法，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)優(yōu)勢(shì)比較明顯，主要有以下幾點(diǎn)：第一，靈敏度高，檢測(cè)限范圍更精準(zhǔn);第二，自動(dòng)化程度高，并且沒(méi)有放射性輻射危害;第三，發(fā)光標(biāo)記物穩(wěn)定，有效期長(zhǎng)，同時(shí)應(yīng)用范圍寬，對(duì)于分子大小不同的抗原、半抗原及抗體都可檢測(cè)。因此，化學(xué)發(fā)光免疫分析在臨床、衛(wèi)生、食品、環(huán)保和軍事等領(lǐng)域正被越來(lái)越多地用于激素、蛋白質(zhì)、腫瘤、毒物、病毒等成分檢測(cè)。

2 免疫分析基本原理

由免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)兩個(gè)關(guān)鍵部分組成了化學(xué)發(fā)光免疫分析的基本原理，化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)主要氧化以及催化的作用于化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，產(chǎn)生一個(gè)激發(fā)態(tài)的中間體，在處于穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)，發(fā)射出光子，然后通過(guò)測(cè)量?jī)x器測(cè)量光量子。通過(guò)標(biāo)記物與發(fā)光強(qiáng)度的關(guān)系，進(jìn)而測(cè)出被測(cè)物質(zhì)含量。而免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)在抗原或抗體上直接標(biāo)記。

3 化學(xué)免疫分析分類

化學(xué)發(fā)光免疫分析法主要以標(biāo)記法的不同來(lái)進(jìn)行分類，目前習(xí)慣上將免疫分析法主要分為兩類，第一主要是標(biāo)記免疫分析法，其次是酶免疫分析法，前者是以化學(xué)發(fā)光標(biāo)記，后者是以酶標(biāo)記，以化學(xué)發(fā)光底物作為信號(hào)試劑來(lái)進(jìn)行發(fā)光，其原理是不相同的。除此之外，包括熒光免疫分析法以及電化學(xué)發(fā)光免疫分析法也是目前存在的化學(xué)免疫法分析方法。

3.1 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析

將化學(xué)發(fā)光劑如吖啶酯類化合物，直接標(biāo)記在抗原上或抗體上，其基本原理是啟動(dòng)發(fā)光劑發(fā)光，快速閃爍。這種標(biāo)記物其化學(xué)反應(yīng)簡(jiǎn)單、快速、無(wú)須催化劑;夾心法用于大分子抗原，競(jìng)爭(zhēng)法主要用于檢測(cè)小分子抗原，另外本底低，非特異性結(jié)合相對(duì)較少光量不會(huì)因?yàn)榉肿哟笮《苡绊?，因此能增加靈敏度，一般常用的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)主要是通過(guò)啟動(dòng)發(fā)光試劑NaOH-H2O2作用而發(fā)光，其發(fā)光非常迅速，小分子物質(zhì)多采用競(jìng)爭(zhēng)法，夾心法主要用于大分子物質(zhì)。

3.2 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析

通過(guò)酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)，再作用于發(fā)光底物，在信號(hào)劑的作用下發(fā)光，然后用發(fā)光測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑，按照標(biāo)記免疫分析，應(yīng)屬酶免疫分析，其操作步驟與酶免分析完全相同。目前常用的標(biāo)記酶為堿性磷酸酶和辣根過(guò)氧化物酶，它們有各自的發(fā)光底物?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析法種類大致有三種，首先是HRP標(biāo)記CLEIA，一般常用3-氨基鄰苯二甲酰肼作為底物，也即是魯米諾或者用其衍生物4-氨基鄰苯二甲酰肼也是可以的，這兩種都是重要的發(fā)光試劑。需要注意的是該底物需要在堿性緩沖溶液中進(jìn)行氧化反應(yīng)，生成激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)然這需要在過(guò)氧化物酶及活性氧存在的條件下進(jìn)行，中間體回到基態(tài)時(shí)就可以發(fā)光，此時(shí)的波長(zhǎng)一般在425nm。曾經(jīng)先前有人用該標(biāo)記底物標(biāo)記抗原或抗體，但后來(lái)發(fā)現(xiàn)其發(fā)光強(qiáng)度多受靈敏度的影響。目前用過(guò)氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記，其發(fā)光強(qiáng)度主要依賴酶免疫反應(yīng)中的酶的濃度大小;其次增強(qiáng)發(fā)光酶免疫分析也是化學(xué)發(fā)光酶免疫分析的一種，它主要是在將增強(qiáng)的發(fā)光劑加入到發(fā)光系統(tǒng)中，加強(qiáng)發(fā)光的信號(hào)強(qiáng)度，并且能夠保持長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定性，在一定程度上提高了該分析方法的準(zhǔn)確性和靈敏度，便于多次測(cè)定。目前在一些現(xiàn)代化的設(shè)備上，還可以由計(jì)算機(jī)進(jìn)行精確控制操作，比如，往系統(tǒng)中加入發(fā)光試劑以及混合、溫育、洗滌等，甚至后期的數(shù)據(jù)處理，進(jìn)而繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，最終完成患者血清樣品的分析并打印出結(jié)果;最后一種就是用ALP標(biāo)記的CLEIA，這種分析方法一般多用環(huán)-1，22-二氧乙烷衍生物作為發(fā)光底物，它的發(fā)光原理主要是其用化學(xué)發(fā)光酶免疫分析底物而設(shè)計(jì)的分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)固，其中的芳香基作為發(fā)光基團(tuán)和酶作用，在發(fā)光試劑的作用下發(fā)光，該底物在堿性磷酸酶的作用下，磷酸酯基發(fā)生水解而脫去一個(gè)磷酸基，就會(huì)產(chǎn)生一個(gè)穩(wěn)定的中間體，然后中間體發(fā)生裂解會(huì)產(chǎn)生金剛烷酮和激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，這種常見(jiàn)底物是AMPPD，其作為磷酸酯酶的直接化學(xué)發(fā)光底物，多用來(lái)檢測(cè)堿性磷酸酯酶和一些配基的結(jié)合物。

4 應(yīng)用

4.1 激素、蛋白質(zhì)和腫瘤檢測(cè)

該系統(tǒng)使反應(yīng)物形成均相混懸液，順磁微粒作為固定相，增大反應(yīng)面積，加速免疫反應(yīng)，快速分離，自動(dòng)洗滌，減少酶和催化劑的使用，pH調(diào)整即可，避免了許多影響因素，廣泛應(yīng)用于甲狀腺功能、藥物檢測(cè)、腫瘤標(biāo)志物及心血管等項(xiàng)目。

4.2 病毒、毒物檢測(cè)

楊秀岑等用ABEI標(biāo)記兔抗大腸桿菌lgG，試樣溫育、離心、沉淀峰值用luminol-H2O2-NaOH 發(fā)光體系測(cè)定;章竹君等測(cè)定了糞樣中的輪狀病毒以HRP酶標(biāo)記;為研究TNT對(duì)人體的毒害作用提供方法，張麗民等以HRP標(biāo)記免疫測(cè)定了血清中4-氨基-2，6-二硝基甲苯，效果非常顯著。

4.3 其他方面的應(yīng)用

被越來(lái)越多地用于免疫測(cè)定中的HRP酶標(biāo)記生成核酸探針，主要采用兩種形式，一種是靶DNA雜交，將HRP直接標(biāo)記在探針上，同時(shí)增強(qiáng)的魯米諾試劑檢測(cè)加入分離后的雜交體。另外一種是將DNA探針標(biāo)記在生物素及地高辛上，然后與靶DNA雜交，再用HRP標(biāo)記的親和素和抗地高辛與分離后的雜交體結(jié)合，最后加入魯米諾試劑氧化發(fā)光。

化學(xué)發(fā)光范文第2篇

【摘要】化學(xué)發(fā)光分析是根據(jù)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光輻射強(qiáng)度確定物質(zhì)含量的一種痕量分析方法，這種技術(shù)日益得到重視，它靈敏度高，線性范圍寬，不需要外來(lái)光源，儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，分析快速快，易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，價(jià)格便宜，選擇性強(qiáng)。常用的化學(xué)發(fā)光技術(shù)有電化學(xué)發(fā)光、化學(xué)發(fā)光免疫分析、微粒子化學(xué)發(fā)光等。本文主要探析此技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】化學(xué)發(fā)光 分類 臨床應(yīng)用

化學(xué)發(fā)光(chemiluminescence，CL)早在19世紀(jì)80年代就得到證實(shí)，即在化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中瞬間以釋放光子的形式放出能量?；瘜W(xué)發(fā)光法因其靈敏度高、線性范圍寬和分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，已在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到廣泛地應(yīng)用。

一 化學(xué)發(fā)光的基本內(nèi)涵

化學(xué)發(fā)光分析法是近30年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種高靈敏的微量及痕量分析法，化學(xué)發(fā)光分析具有靈敏度高、線性范圍寬、不需要外來(lái)光源、分析速度快、儀器設(shè)備相對(duì)簡(jiǎn)單、便宜等優(yōu)點(diǎn)。化學(xué)發(fā)光分析測(cè)定物質(zhì)的方式可分為直接法和間接法。化學(xué)發(fā)光分析反應(yīng)類型可分為酶促反應(yīng)和非酶促反應(yīng)兩類。此外化學(xué)發(fā)光分析法可以與其他分析技術(shù)聯(lián)用，如流動(dòng)注射分析、電化學(xué)分析、免疫分析、固定化試劑技術(shù)、傳感器技術(shù)等分析技術(shù)相結(jié)合。

二 常用的化學(xué)發(fā)光技術(shù)

首先，電化學(xué)發(fā)光。該技術(shù)是通過(guò)對(duì)電極施加一定的電壓進(jìn)行電化學(xué)反應(yīng)而發(fā)光，通過(guò)測(cè)量化學(xué)發(fā)光光譜和強(qiáng)度來(lái)測(cè)定物質(zhì)含量的一種痕量分析方法。它將電分析化學(xué)手段和化學(xué)發(fā)光方法相結(jié)合，具有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，如重現(xiàn)性和靈敏度進(jìn)一步提高，在多種組份同時(shí)存在時(shí)，可施加不同波形、不同電壓的信號(hào)進(jìn)行選擇性測(cè)量等，是潛在的分析手段之一。

第二， 化學(xué)發(fā)光免疫分析是以標(biāo)記發(fā)光劑為示蹤物信號(hào)建立起來(lái)的一種非放射標(biāo)記免疫分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、分析速度快和容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。魯米諾、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學(xué)發(fā)光免疫分析中使用最多的標(biāo)記物。

第三，微粒子化學(xué)發(fā)光是化學(xué)發(fā)光免疫分析的特殊形式，是以化學(xué)發(fā)光劑為底物的酶免疫技術(shù)，同時(shí)應(yīng)用了磁性微珠做固相載體，增加了吸附面積，使抗原抗體最大限度的結(jié)合。微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)所需標(biāo)本量極少，孵育時(shí)間大大縮減，同時(shí)因其選擇性吸附抗原，從而提高了特異性、靈敏性，使測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，并減少污染。

第四，化學(xué)發(fā)光生物傳感器是通過(guò)非創(chuàng)傷或非損傷性的辦法，連續(xù)、實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)地檢測(cè)生物體內(nèi)的某一種或幾種物質(zhì)濃度的技術(shù)。特別是化學(xué)發(fā)光免疫傳感器是將具有分子識(shí)別作用的抗原或抗體以適當(dāng)?shù)姆绞焦潭ɑ瞥?，它結(jié)合了化學(xué)發(fā)光高靈敏度和抗原抗體特異性結(jié)合的高度專一性以及無(wú)污染等特點(diǎn)，是替代放射免疫分析的重要分析工具，已日益受到重視。

三 化學(xué)發(fā)光分析在臨床實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用

第一，化學(xué)發(fā)光法與血液系統(tǒng)疾病，化學(xué)發(fā)光免疫分析在測(cè)定G一CSF上是敏感的，可用于測(cè)定正常人或疑有G一CSF減少疾病的患者血清G一CSF，對(duì)于預(yù)測(cè)免疫抑制劑治療再障的效果有一定的作用。例如，慢性骨髓增生性疾病，如慢性髓性白血病和真性紅細(xì)胞增多癥(Pv)是與中性白細(xì)胞功能失常有關(guān)的。Pv的PMN在用趨化膚(fMLP)刺激后化學(xué)發(fā)光值及丁量減少.這與磷醋酶D活性受損有關(guān)。而沒(méi)有或用PMA刺激的化學(xué)發(fā)光值及了量是正常的。慢性髓性白血病患者也可觀察到這個(gè)現(xiàn)象，但程度更小。

第二，化學(xué)發(fā)光法與消化系統(tǒng)疾病。幽門(mén)螺桿菌(HP)在慢性胃炎和消化性潰瘍的發(fā)病中起著重要作用。病理組織學(xué)研究顯示已感染HP的胃粘膜具有吸引中性白細(xì)胞積聚的特點(diǎn)。在魯米諾增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)土表現(xiàn)為增強(qiáng)；潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸粘膜面雖然有中性白細(xì)胞浸潤(rùn).但有人發(fā)現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎患者和正常人相比，在發(fā)光的峰值、峰時(shí)、斜率方面無(wú)明顯差異。僅27%具有活動(dòng)性潰瘍性結(jié)腸炎患者刺激物有增高的化學(xué)發(fā)光?？赡艿脑蚴窃谶@些患者中性白細(xì)泡不起主要作用或者不呈高活動(dòng)性。慢性肝病(特別是肝癌時(shí))0:的產(chǎn)生和HZOZ一MPO一CL一系統(tǒng)是抑制的。依賴Cypridina蟲(chóng)熒光素類的化學(xué)發(fā)光及依賴魯米諾的化學(xué)發(fā)光均是降低的。但是慢性肝炎由于體內(nèi)免疫復(fù)合物含量的增高而誘導(dǎo)發(fā)光增強(qiáng)，與正常組相比基礎(chǔ)化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)。急性肝炎由于體內(nèi)免疫復(fù)合物增加不明顯，吞噬細(xì)胞應(yīng)答能力及血清調(diào)理活性均未明顯受損。因此，急性肝炎的基礎(chǔ)發(fā)光、峰時(shí)、斜率與正常人相比變化不明顯，但單位PMN峰值低于正常，說(shuō)明急性肝炎中性粒細(xì)胞的吞噬功能也降低；

第三，化學(xué)發(fā)光法可以準(zhǔn)確檢測(cè)心血管疾病。例如，急性心肌梗時(shí)，中性粒細(xì)胞的化學(xué)發(fā)光值逐漸升高且與CK山條高度相關(guān)。因此，可通過(guò)患者PMN一CL的變化估計(jì)病情。冠心病心絞痛時(shí)化學(xué)發(fā)光值是升高的。

第四，化學(xué)發(fā)光法與內(nèi)分泌疾病。首先，甲狀腺疾病。甲狀腺激素是臨床許多疾病(尤其是甲狀腺疾病)診斷常用的指標(biāo)。甲狀腺激素(TH)具有抗氧化作用，這種作用可能是由于中性白細(xì)胞特異的受體一配體相互作用引起的。TH的抗氧化作用可通過(guò)魯米諾增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光法測(cè)定，化學(xué)發(fā)光值表現(xiàn)為抑制。第二，糖尿病。患者由于可溶性或顆粒性因素激活多形核白細(xì)胞(PMN)膜上的NADPH氧化酶產(chǎn)生超氧陰離子自由基，然后轉(zhuǎn)變?yōu)檫^(guò)氧化氫和輕自由基。糖尿病患者分離的PMN的基礎(chǔ)化學(xué)發(fā)光值與正常人相比明顯升高。但當(dāng)NADPH氧化酶被抑制或磷酸己糖旁路被阻斷，則糖尿病組及正常組的化學(xué)發(fā)光值均受到不同程度的抑制。NO可用多種方法測(cè)定，但化學(xué)發(fā)光法是其中最為理想的一種。NO本身不產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，當(dāng)它與超氧陰離子反應(yīng)時(shí)可產(chǎn)生很強(qiáng)的光，外源的精氨酸加入反應(yīng)系統(tǒng)中，化學(xué)發(fā)光值會(huì)更顯著地提高。糖尿病患者的化學(xué)發(fā)光值還可體現(xiàn)循環(huán)免疫復(fù)合物的水平。具有高循環(huán)免疫復(fù)合物的患者，化學(xué)發(fā)光值也高。

參考文獻(xiàn)

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化學(xué)發(fā)光范文第3篇

【關(guān)鍵詞】 胰島素（IRI）；光量子數(shù)；前胰島素原；胰島素原；化學(xué)發(fā)光免疫法

【Abstract】 Objective To explore a reliable method for the determination of insulin.Methods Gather fasting agglutinating blood， centrifugalize them respectively to get the serum，which were directly set on instrument to determine.Results Linear rang: 0～335.0mIU/L，senitivity: the mean quantum of 0mIU/L IRI，10.1mIU/L IRI， 152.0mIU/L IRI and 335.0 mIU/L IRI were 3808，30350，357399 and 684567.Specificity:when the control serum was determined，the measure vlalue was within the standard deviation （SD），95%-105%.Precision:N=60 CV≤5%.Conclusion Chemiluminescence is a reliable，stable measurement method for determination of insulin with high sensitivity，precision and specificity.

【Key words】 insulin;quantum;preproinsulin;proinsulin;chemiluminescence

胰島素（IRI）是一種蛋白質(zhì)激素，這是由胰島中的β細(xì)胞所合成、儲(chǔ)存和分泌的。IRI的功能是調(diào)節(jié)血液中葡萄糖的濃度水平。IRI初期是在β細(xì)胞中，以一種大分子量（分子量為1200）前胰島素原的形式存在。前胰島素原是一條由110氨基酸組成的單鏈前體。前胰島素原被切除掉24個(gè)氨基酸序列后形成胰島素原（分子量為9000），胰島素原是胰島素和C-肽的前體［1］。IRI是由兩條氨基酸鏈組成的。最初，IRI A鏈?zhǔn)怯?1個(gè)氨基酸組成，B鏈?zhǔn)怯?0個(gè)氨基酸組成；而C-肽是由31個(gè)氨基酸組成。IRI是隨餐后血液中葡萄糖的濃度高低而產(chǎn)生應(yīng)答的。

IRI水平雖然不是糖尿病患者常規(guī)診斷方法，但是IRI水平的檢測(cè)對(duì)于空腹低血糖患者、普通人群中的胰島素耐受患者、β細(xì)胞分泌功能異?；颊叩囊饬x非常大［2，3］。

1 材料與方法

1.1 原理

IRI的測(cè)定是一種直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)和雙抗體兩點(diǎn)夾心免疫分析法相結(jié)合的測(cè)定方法。第一種抗體稱為標(biāo)識(shí)抗體，是由單克隆抗胰島素抗體標(biāo)記吖啶酯形成的；第二種抗體稱為固相化抗體，是由單克隆抗胰島素抗體以共價(jià)鍵的方式與順磁性顆粒相結(jié)合形成的。血清中的胰島素與相應(yīng)抗體發(fā)生免疫反應(yīng)后產(chǎn)生光量子，其光量子數(shù)的多少與血清中胰島素的濃度成正比，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算即可求得血清IRI的濃度水平。

1.2 儀器與試劑 儀器：BAER ACS-180型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。試劑（雙試劑）及標(biāo)準(zhǔn)液由廣州寶迪有限公司提供。

1.3 方法 取血清于樣品杯中，置全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上，調(diào)整好檢測(cè)參數(shù)：血清25μl+第一試劑50μl于37℃孵育5min，加第二試劑250μl于37℃孵育2.5min，用蒸餾水對(duì)反應(yīng)杯進(jìn)行分離、抽吸、清洗，最后分別加300μl酸試劑和堿試劑到反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行反應(yīng)發(fā)光，讀取光量子數(shù)，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出結(jié)果。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 采用兩點(diǎn)定標(biāo)法，將標(biāo)準(zhǔn)血清0.0mIU/L和138.0mIU/L安放于儀器的定標(biāo)位置上，編入測(cè)定程序，上機(jī)測(cè)定自動(dòng)打印出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果

2.1 精密度 取混合血清分成兩份，一份當(dāng)天測(cè)定60次，結(jié)果IRI的值為22±0.8mIU/L，其對(duì)應(yīng)的CV值為1.8%；另一份做批間試驗(yàn)，測(cè)定10次，測(cè)定統(tǒng)計(jì)值為21±1.2mIU/L，其對(duì)應(yīng)的CV值為2.8%。

2.2 靈敏度 0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為684567。IRI測(cè)定的范圍為0～335.0mIU/L。

2.3 回收試驗(yàn) 在IRI為25mIU/L的血清中分別加入濃度為1mg/L的胰島素原、濃度為500μg/L的C-肽、濃度為1mg/L的胃泌素、濃度為1mg/L的胰高血糖素、濃度為1mg/L的胰泌素進(jìn)行回收試驗(yàn)，分別測(cè)得其回收率為:100.8%，95.1%，96.6%，100.2%，101.6%。

2.4 線性分析 對(duì)一份定值血清稀釋不同濃度，觀察測(cè)定體系光量子數(shù)的變化量，即為IRI與光量子數(shù)的關(guān)系。結(jié)果顯示：IRI在本法的測(cè)定范圍是0～335.0mIU/L。當(dāng)IRI大于335.0mIU/L時(shí)，開(kāi)始偏離線性。因此對(duì)濃度高的標(biāo)本必須先進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，然后測(cè)定。

2.5 干擾試驗(yàn) 當(dāng)溶血（Hb>5g/L）、黃疸（膽紅素>0.2g/L）時(shí)，對(duì)結(jié)果干擾甚微。

2.6 正常參考值 取100份經(jīng)我院體檢合格者的血清，其中男50份，女50份，年齡19～55歲，平均37歲。檢測(cè)結(jié)果IRI：20.5±17.5mIU/L。男女之間差異無(wú)顯著性（P>0.05）。

3 討論

目前定量測(cè)定IRI的方法不多，過(guò)去一般用放射免疫法，該法測(cè)定步驟繁瑣，為半自動(dòng)化操作，測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)達(dá)3天，測(cè)定范圍窄，且使用試劑具有放射性，對(duì)操作人員造成身體傷害及對(duì)周圍環(huán)境形成污染?，F(xiàn)在基本已被化學(xué)發(fā)光免疫法所代替，該法測(cè)定步驟簡(jiǎn)單，為全自動(dòng)化操作，測(cè)定時(shí)間短，全過(guò)程最短為半小時(shí)即可完成，而它使用的試劑安全無(wú)放射性，為一般化學(xué)試劑，對(duì)操作人員無(wú)傷害，對(duì)周圍環(huán)境污染甚微。不過(guò)它也有缺點(diǎn)：其試劑為抗體試劑，有效期短，容易失效，定標(biāo)周期短，一般為2周。在試劑的有效期內(nèi)和定標(biāo)周期內(nèi)，對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定，其結(jié)果非常準(zhǔn)確可靠。綜上所述，化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定胰島素（IRI）是目前首選的方法。

參考文獻(xiàn)

1 康格非，巫向前.臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗(yàn)，第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001，256.

2 Chevenne D，Trivin F，Porquet D.Insulin assays and reference values.Diabetes Metab，1999，25（6）：459-476.

化學(xué)發(fā)光范文第4篇

2月來(lái)筆者所在醫(yī)院接受體檢的60例乙型肝炎病毒感染患者的血液標(biāo)本，分離血清后保存待測(cè)，分別采用光激化學(xué)發(fā)光法（LICA）和化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA）檢測(cè)60例乙型肝炎病毒感染患者的五項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志。結(jié)果：兩種檢測(cè)方法檢測(cè)乙型肝炎病毒感染患者血清學(xué)標(biāo)志HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe的陽(yáng)性率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。但化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法檢測(cè)抗HBc的陽(yáng)性率明顯高于光激化學(xué)發(fā)光法，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

【關(guān)鍵詞】 光激化學(xué)發(fā)光法； 化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法； 乙型肝炎病毒； 血清學(xué)標(biāo)志； 性能

中圖分類號(hào) R512.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2016）3-0060-02

doi：10.14033/ki.cfmr.2016.3.032

乙型肝炎病毒屬于嗜肝DNA病毒科，是一種DAN病毒，易感染群體為人類和大猩猩，是引發(fā)乙型病毒性肝炎的主要病毒[1]。相關(guān)臨床數(shù)據(jù)調(diào)查顯示我國(guó)乙型肝炎感染率為60%～70%，約有7%的人口攜帶乙肝表面抗原，照此計(jì)算，我國(guó)約有9300萬(wàn)人攜帶乙型肝炎病毒[2]。早期我國(guó)臨床多采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志，檢測(cè)準(zhǔn)確性較低。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，近年來(lái)化學(xué)發(fā)光技術(shù)被廣泛應(yīng)用于乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志檢測(cè)中，筆者所在醫(yī)院本次針對(duì)光激化學(xué)發(fā)光法在乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志檢測(cè)中的應(yīng)用性能進(jìn)行了研究和評(píng)價(jià)，現(xiàn)做出以下整理報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入2014年9月-2015年2月來(lái)筆者所在醫(yī)院接受體檢的60例乙型肝炎病毒感染患者參與本次研究，60例患者中，男32例，女28例，年齡19～71歲，平均（42.4±1.5）歲。60例患者均在參與研究前詳細(xì)知曉筆者所在醫(yī)院本次研究?jī)?nèi)容，為自愿性參與本次研究，且在參與研究前均已簽署臨床研究知情同意書(shū)。

1.2 研究方法

1.2.1 血液樣本 于清晨采集60例患者的空腹靜脈血，使用離心機(jī)以3000 r/min的速度分離血清，并保存在零下4 ℃的冰箱中待測(cè)。乙型肝炎病毒五項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志包括HBsAg（乙型肝炎表面抗原）、抗HBs（乙型肝炎表面抗體）、HBeAg（乙型肝炎e抗原）、抗HBe（乙型肝炎e抗體）和抗HBc（乙肝核心抗體）。

1.2.2 儀器及試劑 光激化學(xué)發(fā)光法所使用的檢測(cè)儀器為博陽(yáng)生物科技（上海）有限公司生產(chǎn)的高通量免疫分析儀、儀器配套試劑和全自動(dòng)移液器。化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法所使用的檢測(cè)儀器為美國(guó)雅培制藥有限公司診斷產(chǎn)品部生產(chǎn)的i2000SR免疫發(fā)光檢測(cè)儀和儀器配套試劑。分別使用上述兩種儀器檢測(cè)

60例乙型肝炎病毒感染患者的五項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志。

1.3 陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 光激化學(xué)方光 抗HBc：>5.3 PEIU/ml；HBsAg：>0.2 IU/ml；抗HBs：>10 mIU/ml；HBeAg：>1 PEIU/ml；抗HBe：>2 PEIU/ml。

1.3.2 化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法 抗HBc：>1 S/CO；HBsAg：抗>0.5 IU/ml；抗HBs：>10 mIU/ml；HBeAg：>1 S/CO；抗HBe：

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，P

2 結(jié)果

檢測(cè)發(fā)現(xiàn)光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎病毒感染患者血清學(xué)標(biāo)志HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe的陽(yáng)性率分別為91.7%、88.3%、93.3%和86.7%，與采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法檢測(cè)的93.0%、85.0%、90.0%和91.7%比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但檢測(cè)抗HBc的陽(yáng)性率為63.3%，明顯低于化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法的85.0%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

酶聯(lián)免疫吸附法為我國(guó)臨床檢測(cè)乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志的常用方法，該種檢測(cè)方法所具有的臨床優(yōu)勢(shì)主要表現(xiàn)為可以最大程度的避免對(duì)環(huán)境和患者機(jī)體的危害、操作簡(jiǎn)單、試劑有效期長(zhǎng)，但因其靈敏度重復(fù)性較化學(xué)發(fā)光法差，酶純度和反應(yīng)過(guò)程易受到環(huán)境的影響，假陽(yáng)性檢出率和漏檢率較高，現(xiàn)階段逐漸被化學(xué)發(fā)光法所取代[3]。目前臨床上比較常用的化學(xué)發(fā)光法主要為光激化學(xué)發(fā)光法[4]。光激化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)原理為單線態(tài)氧分子能量傳遞發(fā)光免疫分析技術(shù)，并在此技術(shù)上應(yīng)用了納米級(jí)顆粒，不僅可以有效增加生物分子的包被面積，同時(shí)納米級(jí)顆粒可在液相中保持穩(wěn)定的懸浮狀態(tài)，能夠借助結(jié)合發(fā)光原理進(jìn)行免清洗和均相檢測(cè)。此外，該種檢測(cè)技術(shù)還應(yīng)用了鏈霉親和素-生物素放大系統(tǒng)，該系統(tǒng)的作用是促使單位體積中的生物分子濃度提高，以實(shí)現(xiàn)提高檢測(cè)物質(zhì)敏感性，減少試劑用量的目標(biāo)[5]。

總結(jié)光激化學(xué)發(fā)光法的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)主要包括以下幾點(diǎn)，（1）均相反應(yīng)：酶聯(lián)免疫吸附法和化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法檢測(cè)乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志均為非均相反應(yīng)，該種反應(yīng)方法存在的缺點(diǎn)為反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)、反應(yīng)體系溫度欠均勻和反應(yīng)不充分。而光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)過(guò)程中的反應(yīng)過(guò)程均為均相反應(yīng)，與非均相反應(yīng)相反具有反應(yīng)時(shí)間短、反應(yīng)體系溫度均勻、反應(yīng)充分等優(yōu)勢(shì)，可有效提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[6]。（2）可免清洗：由于光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志的均相反應(yīng)過(guò)程中應(yīng)用了結(jié)合發(fā)光原理，因此無(wú)需進(jìn)行清洗分離，即可有效避免均相反應(yīng)過(guò)程中的交叉污染和隨機(jī)誤差。（3）使用試劑量少：實(shí)踐應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志時(shí)，每個(gè)檢測(cè)指標(biāo)僅需使用25 μl試劑，在一定程度上提高了小樣本檢測(cè)小型化、芯片化和高通量的可能性[7]。（4）敏感性：光激化學(xué)發(fā)光法應(yīng)用了納米級(jí)顆粒，不僅增加了均相反應(yīng)的表面積，同時(shí)還有效提高了檢測(cè)過(guò)程的敏感性，縮短了檢測(cè)時(shí)間[8]。

分析光激化學(xué)發(fā)光法在檢測(cè)乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志抗HBc時(shí)存在應(yīng)用局限性的原因主要為以下幾點(diǎn)：（1）光激化學(xué)發(fā)光法與化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法選擇HBc原材料和溯源選擇存在一定程度的差異；（2）光激化學(xué)發(fā)光法與化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法的檢測(cè)原理不同，光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志抗HBc的原理為競(jìng)爭(zhēng)法，化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法檢測(cè)乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志抗HBc的原理為夾心法，當(dāng)兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)差異時(shí)，檢驗(yàn)者可采用第三種檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證。筆者所在醫(yī)院本次研究因檢測(cè)樣本數(shù)量有限，未能進(jìn)行第三方驗(yàn)證。（3）本次研究發(fā)現(xiàn)，光激化學(xué)發(fā)光法乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志抗HBc的檢出能力不足，還有待進(jìn)一步提高，但在檢測(cè)其他乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志時(shí)符合率很高。

筆者所在醫(yī)院本次對(duì)光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志的性能進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)采用光激化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎病毒感染血清學(xué)標(biāo)志HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe的陽(yáng)性率與化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但檢測(cè)抗HBc的陽(yáng)性率卻明顯低于化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（P

參考文獻(xiàn)

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化學(xué)發(fā)光范文第5篇

關(guān)鍵詞：人類絨毛膜促性腺激素；全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀；異位妊娠；葡萄胎

人類絨毛膜促性腺激素（HCG）是由胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌一種具有促進(jìn)腺發(fā)育的一種糖蛋白，臨床上常用于診斷妊娠、異位妊娠、葡萄胎等疾病的診斷和治療。全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀是由西門(mén)子采用ADVIA Centaur Cp系統(tǒng)直接檢測(cè)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度。ADVIA Centaur cp檢測(cè)在標(biāo)記試劑中采用吖啶酯作為標(biāo)記物采用順磁微粒作為固相。系統(tǒng)采用多種檢測(cè)反應(yīng)類型來(lái)檢測(cè)抗原或抗體。筆者采用該方法檢測(cè)妊娠期及患者血清HCG的變化程度進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1  一般資料：選取78例與妊娠相關(guān)的疾病患者，年齡25～35歲，停經(jīng)均在35 d～10周；妊娠期30例，異位妊娠30例，葡萄胎18例，均作B超、手術(shù)及病理檢查已確診。

1.2  儀器與試劑：西門(mén)子全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀及配套的血清HCG試劑，均由西門(mén)子公司出產(chǎn)。

1.3  檢測(cè)方法：抽取受檢者靜脈血2 ml，分離血清。嚴(yán)格按照全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀的操作步驟進(jìn)行操作。

1.4  結(jié)果判別：非妊娠婦女血清HCG參考值為0～10 mIU/ml，妊娠婦女血清HCG參考值為＞10 mIU/ml葡萄胎、異位妊娠患者血清HCG參考＞1 000 mIU/ml。

2  結(jié)果

各組血清HCG檢測(cè)結(jié)果：見(jiàn)表1。全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀在妊娠初期就能快速、準(zhǔn)確提早的檢測(cè)到妊娠期、異位妊娠、葡萄胎血清中血HCG的含量，有效的給臨床提出了診斷方案。

表1  各組血清HCG檢測(cè)結(jié)果（mIU/ml）

名稱

35 d檢測(cè)血HCG均值

8～10周檢測(cè)血HCG均值

10周以后檢測(cè)血HCG均值

妊娠期

400

2 345

1 022

異位妊娠

1 345

4 890

2 345

葡萄胎

3 845

1 235

68 266.5

3 討論

在妊娠期，血清HCG是呈倍數(shù)增長(zhǎng)的。在正常情況，妊娠35～40 d血清HCG的數(shù)值僅高于參考值的2倍左右，8～10周可以出現(xiàn)最高峰值，1～2周后可以下降，利用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定妊娠期的血HCG在35 d就可以測(cè)到。在我院就診的妊娠期30位孕婦中，有兩位35 d未來(lái)月經(jīng)，測(cè)的尿中HCG呈陰性反應(yīng)，但用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)的血清HCG數(shù)值就＞20 mIU/ml。在醫(yī)生建議指導(dǎo)下，1周后來(lái)實(shí)驗(yàn)室檢查血清HCG，這時(shí)測(cè)的血清HCG就開(kāi)始上升到幾千，隨后2 d復(fù)查一次血清HCG就成倍增長(zhǎng)[1-3]。

在異位妊娠期，用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定血HCG，35～40 d就可以測(cè)得血HCG數(shù)值在兩千以上，經(jīng)過(guò)治療或手術(shù)后，明顯可看到血清HCG下降到幾百，在經(jīng)過(guò)1周的治療血清HCG可以降到幾十。在我院就診的30位異位妊娠患者中，有1例患者陰道流血半個(gè)月，B超提示異位妊娠，但尿HCG呈陰性，全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)的血HCG數(shù)值為941 mIU/ml，隔2 d復(fù)查血清HCG為1 200 mIU/ml，提示緩慢增長(zhǎng)，醫(yī)生診斷為異位妊娠。

用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)葡萄胎患者血清HCG，測(cè)的血清HCG數(shù)值可高達(dá)682 665.6的高數(shù)值。在檢測(cè)葡萄胎患者血清HCG時(shí)，先用HCG金標(biāo)條測(cè)一下血清中的HCG如果測(cè)定線比質(zhì)控線深的多，就要手工倍比稀釋，方法：加患者血清100 μl再加全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀專用血清HCG稀釋液200 μl，上機(jī)再點(diǎn)擊1:200倍稀釋這樣出來(lái)的結(jié)果乘以3，就能測(cè)到葡萄胎患者血清HCG的最高值。葡萄胎患者在醫(yī)生給與清宮治療后，測(cè)的血清HCG是下降的數(shù)值為2 000 mIU/ml。在1個(gè)月的治療過(guò)程中，血清HCG可降至100 mIU/ml以下。在我院就診的18例葡萄胎患者中，其中有1例葡萄胎患者復(fù)發(fā)了，剛到我院就診時(shí)，2個(gè)月未來(lái)月經(jīng)，B超提示葡萄胎，用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)得血清HCG數(shù)值為634 502 mIU/ml，隨后經(jīng)過(guò)復(fù)查治療可以使血清HCG降到120 mIU/ml。但在3個(gè)月回訪檢查中，再次妊娠葡萄胎停經(jīng)45 d測(cè)的血清HCG數(shù)值為6 482 mIU/ml，根據(jù)B超提示、病理檢查，醫(yī)生診斷為復(fù)發(fā)的葡萄胎患者，給與治療1周后測(cè)的血HCG數(shù)值為125 mIU/ml。

全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)血清HCG具有提早、快速、準(zhǔn)確、可靠、靈敏的特點(diǎn)。因此全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)血清HCG得到臨床醫(yī)生的認(rèn)可與應(yīng)用。我希望在今后的工作中能進(jìn)一步研究全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光對(duì)各個(gè)學(xué)科的應(yīng)用，為臨床提供準(zhǔn)確、無(wú)誤、快速的試驗(yàn)結(jié)果。

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