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楊絳隱身衣范文第1篇

1997年，被楊絳稱為“我平生唯一杰作”的愛女錢瑗去世。一年后，錢鐘書臨終，一眼未合好，楊絳附他耳邊說：“你放心，有我呢！”其內(nèi)心之沉穩(wěn)和強(qiáng)大，令人肅然起敬。“錢鐘書逃走了，我也想逃走，但是逃到哪里去呢？我壓根不能逃，得留在人世間，打掃現(xiàn)場(chǎng)，盡我應(yīng)盡的責(zé)任?！碑?dāng)年已近九十高齡的楊絳開始翻譯柏拉圖的《斐多篇》。2003年，《我們仨》出版問世，這本書寫盡了她對(duì)丈夫和女兒最深切綿長(zhǎng)的懷念，感動(dòng)了無數(shù)中國(guó)人。時(shí)隔四年后，96歲的楊絳又推出一本散文集《走到人生邊上》，探討人生價(jià)值和靈魂的去向，被評(píng)論家稱贊：“九十六歲的文字，竟具有初生嬰兒的純真和美麗?！弊叩饺松吷?，她愈戰(zhàn)愈勇，20卷的《錢鐘書手稿集?中文筆記》也在2011年面世……這位百歲老人的意志和精力，讓所有人驚嘆。

這是她一貫身心修養(yǎng)的成果。據(jù)楊絳的親戚講述，她嚴(yán)格控制飲食，少吃油膩，喜歡買了大棒骨敲碎煮湯，再將湯煮黑木耳，每天一小碗，以保持骨骼硬朗。她還習(xí)慣每日早上散步、做大雁功，時(shí)常徘徊樹下，低吟淺詠，呼吸新鮮空氣。高齡后，改為每天在家里慢走7000步，直到現(xiàn)在還能彎腰手碰到地面。

當(dāng)然更多的秘訣來自內(nèi)心的安寧與淡泊。楊絳有篇散文名為《隱身衣》，文中直抒她和錢鐘書最想要的“仙家法寶”莫過于“隱身衣”，隱于世事喧嘩之外，陶陶然專心治學(xué)。生活中的她的確幾近“隱身”，低調(diào)至極，幾乎婉拒一切媒體的來訪。2004年《楊絳文集》出版，出版社準(zhǔn)備大張旗鼓籌劃其作品研討會(huì)，楊絳打了比方風(fēng)趣回絕：“稿子交出去了，賣書就不是我該管的事了。我只是一滴清水，不是肥皂水，不能吹泡泡?！?/p>

錢鐘書去世后，楊絳以全家三人的名義，將高達(dá)800多萬元的稿費(fèi)和版稅全部捐給母校清華大學(xué)，設(shè)立了“好讀書”獎(jiǎng)學(xué)金。楊絳和錢鐘書一樣，出了名的不喜過生日，九十歲壽辰時(shí)，她為避打擾，專門躲進(jìn)清華大學(xué)招待所住了幾日。她早就借翻譯英國(guó)詩(shī)人蘭德那首著名的詩(shī)，寫下自己無聲的心語：“我和誰都不爭(zhēng)，和誰爭(zhēng)我都不屑；我愛大自然，其次就是藝術(shù)；我雙手烤著生命之火取暖；火萎了，我也準(zhǔn)備走了?！保ń鹎伲?/p>

老戲骨雷恪生 喜歡爬山喝藥酒

曾在《大宅門》、《雷雨》、《水滸》、《秋菊打官司》等一百多部影視劇、話劇中飾演各類角色，被人們譽(yù)為“影壇常青樹”的老戲骨雷恪生，而今雖已76歲高齡，但仍舊精力旺盛。每年要接拍4-5部影視劇，主演多部話劇，有時(shí)還在央視春晚的小品中“客串”。

老人之所以能承受如此大的工作量，全靠他長(zhǎng)期以來關(guān)注健康，重視養(yǎng)生。

雷老住在景山附近，空閑時(shí)便去爬山，這已成了他的一個(gè)習(xí)慣。他認(rèn)為爬山有三個(gè)好處：一是鍛煉人的筋骨；二是能提高人的肺活量，改善人的腸胃功能；三是邊爬山邊欣賞周圍美景，呼吸著清新空氣，人會(huì)感到心曠神怡。他說：“我已70多歲高齡，每次體檢絕大多數(shù)指標(biāo)都合格。身體這么好，與長(zhǎng)年堅(jiān)持爬山，練得一身好身體不無關(guān)系。”

楊絳隱身衣范文第2篇

【關(guān)鍵詞】 姜黃素

Inhibitory Effect of Curcumin on Angiogenesis Induced by Brain Derived Neurotrophic Factor from Multiple Myeloma Cells

Abstract

In order to explore the probability of curcumin treating multiple myeloma (MM) via the inhibition of angiogenesis，the expressions of brain derived neurotrophic factor(BDNF) and its specific receptor in human MM cells and endothelial cells were detected by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). The angiogenic activity was evaluated by endothelial cell migration assay and tubule formation assay in vitro. The results showed that exogenous BDNF significantly induced endothelial cell tubule formation and endothelial cell migration，these two effects were inhibited by curcumin. Furthermore，BDNF was detected in the MM cell and TrkB was detected in the endothelial cell and curcumin depressed the mRNA expression of BDNF and TrkB in the dose- and time-dependent manners. It is concluded that BDNF is a novel angiogenesis protein. Curcumin interrupts the interaction between multiple myeloma cells and endothelial cells by reducing TrkB expression in endothelial cells and inhibiting BDNF production in multiple myeloma cells，eventually，resulting in inhibition of angiogenesis. This is probably one part of the mechanism of the curcumin treating MM via the inhibition of angiogenesis.

Key words curcumin；brain derived neurotrophic factor；multiple myeloma；angiogenesis

血管新生在多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）的發(fā)生與發(fā)展中占有重要的地位，我們近期的研究結(jié)果表明，MM患者高表達(dá)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF），且BDNF具有促進(jìn)血管增殖活性［1，2］。在本試驗(yàn)中我們檢測(cè)了姜黃素對(duì)BDNF體外誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞血管新生的影響及MM細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞中BDNF和TrkB轉(zhuǎn)錄水平的改變，以初步探討姜黃素通過抑制血管新生途徑治療MM的可能機(jī)制。

材料和方法

細(xì)胞株及其培養(yǎng)

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株KM3由上海醫(yī)院候健教授惠贈(zèng)，內(nèi)皮細(xì)胞株 ECV304 購(gòu)于武漢大學(xué)典型物種保藏中心。將 KM3 和 ECV304 分別置于含

10%胎牛血清的RPMI 1640和DMEM培養(yǎng)液（Gibcol）中，在37℃、 5％ CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

主要試劑

姜黃素（Sigma公司），以二甲亞砜(DMSO)配成8 mmol/L儲(chǔ)存液，使用前用無菌的PBS稀釋至工作濃度。BDNF（R&D system）用含1%牛血清白蛋白的PBS溶解至50 μg/ml，儲(chǔ)存于-20℃；使用時(shí)終濃度為100 ng/ml。去生長(zhǎng)因子基質(zhì)膠（Matrigel） 為Becton Dickinson公司產(chǎn)品。引物由上海生工公司合成（引物序列及擴(kuò)增片段大小見表1），M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶、Oligo(15dt)為promega公司產(chǎn)品，RNasin、Taq酶為Biostar公司產(chǎn)品，dNTP為MBI公司產(chǎn)品。Table 1. Sequence of primers and size of amplified fragments（略）

內(nèi)皮細(xì)胞遷移試驗(yàn)

參考早期文獻(xiàn)［3］報(bào)道，于12孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔接種1×105 ECV304細(xì)胞。單層培養(yǎng)至細(xì)胞覆蓋率為90％左右時(shí)，換1% FBS的DMEM培養(yǎng)12小時(shí)，使細(xì)胞同步化。用橡膠刮片在孔內(nèi)刮出兩條整齊而平行的20 mm×5 mm刮痕，棄上清，加入新鮮含1％血清的培養(yǎng)液1 ml并在不同孔內(nèi)加入實(shí)驗(yàn)相應(yīng)空白對(duì)照（PBS）、陽性對(duì)照（BDNF）和試驗(yàn)組（ BDNF＋不同濃度的姜黃素）。37℃、5％ CO2下培養(yǎng)24小時(shí)。4％多聚甲醛固定，瑞氏-姬姆薩染色后光學(xué)顯微鏡下（×100）觀察刮痕。每孔隨機(jī)選擇5個(gè)視野，進(jìn)行遷移細(xì)胞計(jì)數(shù)，每組重復(fù)3次。

內(nèi)皮細(xì)胞小管形成試驗(yàn)

參考早期文獻(xiàn)［4］報(bào)道，ECV304在含1％血清的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)12小時(shí)后收獲。于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔加入250 μl Matrigel，37℃，5％ CO2下溫育90分鐘使膠凝固。每孔加入ECV304制成的5×105/ml不含血清的細(xì)胞懸液400 μl，并添加實(shí)驗(yàn)所需的空白對(duì)照（PBS）、陽性對(duì)照（BDNF）和試驗(yàn)組（ BDNF＋不同濃度的姜黃素）。37℃，5％ CO2下培養(yǎng)，24小時(shí)后光學(xué)顯微鏡下（×100）觀察細(xì)胞管狀排列及管狀結(jié)構(gòu)數(shù)量、完整程度。

逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測(cè)BDNF的和TrkB的mRNA

細(xì)胞總RNA的提取 采用異硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法提取KM3與ECV304的總RNA，用DNA/RNA紫外檢測(cè)儀測(cè)定其含量及純度。

逆轉(zhuǎn)錄 取總RNA 9 μl，加入M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶1 μl，5×Rt buffer 4 μl，Oligo(dt)1 μl，RNasin 0.5 μl，dNTP 4 μl，用DEPC處理過的雙蒸水補(bǔ)充至20 μl。42 ℃水浴1小時(shí)，95 ℃ 5分鐘滅活M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶，-20℃保存或即用。

PCR擴(kuò)增 取1 μg cDNA，加Taq酶0.5 μl，10×buffer 5 μl，dNTP 2 μl，BDNF、TrkB或β -actin上下游引物各2 μl，用DEPC處理過的雙蒸水補(bǔ)充至50 μl，上機(jī)檢測(cè)。BDNF與TrkB擴(kuò)增條件分別為: 95 ℃預(yù)變性4分鐘，95 ℃變性60秒，55 ℃退火30秒，72 ℃延伸60秒，共30個(gè)循環(huán)；94 ℃預(yù)變性4分鐘，94 ℃變性30秒，65 ℃退火30秒，72 ℃延伸60秒，共32個(gè)循環(huán)。

電泳 取PCR產(chǎn)物4 μl于1.5%瓊脂糖凝膠上電泳15分鐘，紫外光顯影。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以x±SD 表示，組間分析采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。

結(jié)果

姜黃素阻斷BDNF誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移效應(yīng)

在未作任何處理的情況下，內(nèi)皮細(xì)胞具有一定的遷移能力，100 ng/ml 的BDNF能明顯促進(jìn)其遷移，每個(gè)視野的遷移細(xì)胞總數(shù)明顯地增加。姜黃素阻斷BDNF誘導(dǎo)的遷移效應(yīng)，遷移細(xì)胞總數(shù)隨著姜黃素濃度的升高而下降，20 μmol/L時(shí)幾乎無細(xì)胞移動(dòng)，30 μmol/L時(shí)貼壁的細(xì)胞部分開始脫落，細(xì)胞皺縮凋亡，40 μmol/L時(shí)絕大多數(shù)細(xì)胞脫落、皺縮凋亡（圖1）。BDNF組與對(duì)照組之間、姜黃素組（10，20 μmol/L）與BDNF組相比，遷移細(xì)胞總數(shù)具有顯著差異（P

姜黃素阻斷BDNF誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞小管形成效應(yīng)

BDNF誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞在Matrigel上形成小管狀結(jié)構(gòu)，管壁完整，管腔大。姜黃素具有抑制BDNF誘導(dǎo)的小管形成效應(yīng)的能力，并隨濃度的增加而增強(qiáng)。30 μmol/L時(shí)幾乎無管狀結(jié)構(gòu)形成，部分細(xì)胞皺縮凋亡，40 μmol/L時(shí)細(xì)胞聚集成團(tuán)，貼壁困難（圖2）。BDNF組與對(duì)照組之間、姜黃素組（10，20，30 μmol/L）與BDNF組相比，小管總面積具有顯著差異（P

姜黃素對(duì)KM3細(xì)胞BDNF表達(dá)的影響

用0、10、 20、 30、40 μmol/L 的姜黃素孵育KM3細(xì)胞24小時(shí)，以0.5%的DMSO作為對(duì)照，排除DMSO對(duì)KM3的影響。結(jié)果顯示，隨著濃度的增加KM3細(xì)胞表達(dá)的BDNF mRNA逐漸減少，40 μmol/L時(shí)已檢測(cè)不到BDNF mRNA的表達(dá)（圖3）。

以20 μmol/L 的姜黃素分別孵育KM3細(xì)胞12、24、36、48小時(shí)，隨著時(shí)間的增加KM3細(xì)胞表達(dá)的BDNF mRNA逐漸減少，作用48小時(shí)后KM3細(xì)胞無BDNF mRNA表達(dá)（圖4）。

姜黃素對(duì)ECV304細(xì)胞TrkB表達(dá)的影響

用0、 10、 20、 30、40 μmol/L 的姜黃素孵育ECV304細(xì)胞24小時(shí)，以0.5%的DMSO作為對(duì)照，排除DMSO對(duì)ECV304的影響。結(jié)果表明，隨著濃度的增加ECV304細(xì)胞表達(dá)的TrkB mRNA逐漸減少，在姜黃素濃度為30 μmol/L時(shí)已檢測(cè)不到TrkB mRNA的表達(dá)（圖5）。

以20 μmol/L 的姜黃素分別孵育ECV304細(xì)胞12、24、36、48小時(shí)，結(jié)果隨著時(shí)間的增加ECV304細(xì)胞表達(dá)的TrkBmRNA逐漸減少，作用36小時(shí)后ECV304細(xì)胞無TrkB mRNA表達(dá)（圖6）。

討 論

姜黃素是從草本植物姜黃的根莖中提取出來的一種酚類色素，其抗癌作用倍受矚目，它主要通過抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、調(diào)控癌基因和抑癌基因的表達(dá)、誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞凋亡等機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)［5，6］。近年來國(guó)外學(xué)者將姜黃素的研究延伸到防治MM中。Alok等［7，8］證實(shí)，姜黃素下調(diào)NF-κB及由NF-κB調(diào)節(jié)的基因產(chǎn)物IκBα、Bcl-2、Bcl-xl、cycle D1和IL-6，將細(xì)胞周期阻滯于G1/S，繼而抑制MM細(xì)胞系的增殖；從MM患者骨髓中分離的CD138+細(xì)胞常規(guī)表達(dá)活化形式的NF-κB和STAT3，姜黃素能抑制這些轉(zhuǎn)錄因子的活性、削弱細(xì)胞分泌細(xì)胞因子和黏附于骨髓基質(zhì)細(xì)胞的能力。

血管新生在MM的發(fā)生發(fā)展中占重要地位，以抑制血管新生為目標(biāo)的治療已成為難治性/復(fù)發(fā)性MM的重要著眼點(diǎn)。有研究表明姜黃素具有抗血管新生的活性［9，10］，Passos等［11］在對(duì)激光誘導(dǎo)的脈絡(luò)膜血管新生大鼠動(dòng)物模型的研究中發(fā)現(xiàn)，膜內(nèi)注射姜黃素能有效抑制脈絡(luò)膜的血管新生。Thaloor等［9］的試驗(yàn)表明，姜黃素能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞小管形成，在內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)發(fā)生過程中充當(dāng)血管新生阻滯劑的角色。然而，姜黃素是否能抑制MM的血管新生，在國(guó)內(nèi)外尚無人研究。

內(nèi)皮細(xì)胞遷移試驗(yàn)和小管形成試驗(yàn)是評(píng)價(jià)體外內(nèi)皮細(xì)胞血管形成能力的兩種重要指標(biāo)。在本實(shí)驗(yàn)中100 ng/ml的BDNF能夠有效地促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和小管形成，而姜黃素可明顯阻斷BDNF誘導(dǎo)的這一血管新生效應(yīng)，并呈劑量依賴性。另外，我們以往的研究結(jié)果證實(shí)，BDNF是一種具有促進(jìn)血管新生活性的細(xì)胞因子，且與MM有著密切的聯(lián)系，高表達(dá)于MM患者外周血血漿中，其升高趨勢(shì)與VEGF的升高趨勢(shì)具有相關(guān)性［1，2］。因此推測(cè)姜黃素可能會(huì)通過抑制BDNF誘導(dǎo)的血管新生而起到治療MM的作用。

通過阻斷血管新生的方法來防治腫瘤的關(guān)鍵在于下調(diào)血管新生因子，阻斷腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞間的相互作用，繼而抑制血管新生。Pollmann等［12］指出，姜黃素通過下調(diào)HL-60與HeLa細(xì)胞c-jun蛋白的表達(dá)，減少大約75% VEGF蛋白的分泌，達(dá)到抗腫瘤、抗血管新生的效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，在MM細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中，在轉(zhuǎn)錄水平上能分別檢測(cè)到BDNF及其特異性的受體TrkB的表達(dá)，而姜黃素能同時(shí)阻斷兩種細(xì)胞中目標(biāo)產(chǎn)物的表達(dá)，兩者均呈時(shí)間-劑量依賴性。眾所周知，腫瘤細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子與內(nèi)皮細(xì)胞膜上的特異性受體結(jié)合是血管新生的始動(dòng)因素，姜黃素同時(shí)下調(diào)兩種細(xì)胞BDNF和TrkB表達(dá)，必然阻礙了MM細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞通過BDNF介導(dǎo)的生物信息的傳遞。

綜上所述，BDNF是一種具有促進(jìn)血管增殖活性的細(xì)胞因子，姜黃素可以分別下調(diào)MM細(xì)胞BDNF與內(nèi)皮細(xì)胞TrkB的表達(dá)，阻礙兩者間的相互作用，從而抑制血管新生，這可能成為治療MM潛在的作用靶點(diǎn)。

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