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摘要：目的優(yōu)選三仙壯骨膠囊水提部位的最佳提取工藝。方法采用高效液相色譜法測定川續(xù)斷皂苷VI的含量，并以川續(xù)斷皂苷VI的含量作為指標，采用正交設(shè)計試驗考察三仙壯骨膠囊的最佳提取工藝。結(jié)果最佳提取工藝為:加10倍量的水煎煮2次，每次1h。結(jié)論該提取方法合理、可行，為生產(chǎn)提供了實驗依據(jù)。

關(guān)鍵詞：三仙壯骨膠囊；提取工藝；高效液相色譜法；川續(xù)斷皂苷VI

三仙壯骨膠囊是由續(xù)斷、淫羊藿、獨一味、當歸等幾味中藥組成，本品為研制者常年行醫(yī)的經(jīng)驗方，臨床用于治療跌打損傷、筋骨扭傷、瘀積腫痛。方中續(xù)斷、淫羊藿、獨一味主要含有皂苷類成分及黃酮苷類成分，在水中溶解性較好，故此三味藥材采用水煎煮方式提取。本研究采用正交設(shè)計法，以川續(xù)斷皂苷VI為指標，用高效液相色譜法測定其含量［1-4］，以優(yōu)選三仙壯骨膠囊水提部位的最佳工藝。

1材料與試劑

Waters2695高效液相色譜儀，Waters2996PDA檢測器,Empowers色譜工作站，DiamonsilC18柱（5μm，250mm×4.6mm，迪馬公司）。KQ100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；BSZZ4S型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

川續(xù)斷皂苷VI對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111685200401）；乙腈為色譜純；水為屈臣氏蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1正交試驗設(shè)計

按處方稱取續(xù)斷、淫羊藿、獨一味藥材，加水進行煎煮，在煎煮過程中，采用L9(34)表安排正交試驗，以續(xù)斷中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量為指標，對提取效果影響較大的加水量、煎煮次數(shù)及煎煮時間3個因素進行考察，各因素水平見表1。表1因素水平表

2.2川續(xù)斷皂苷VI含量測定

2.2.1色譜條件色譜柱為DiamonsilC18柱（5μm，250mm×4.6mm）；流動相為乙腈水（體積比30∶70）；檢測波長為210nm；柱溫為25℃；流速為1mL/min；進樣量為10μL。

2.2.2對照品溶液的制備精密稱取川續(xù)斷皂苷VI對照品3.09mg，置2mL容量瓶中，用甲醇溶解配制成質(zhì)量濃度為1.545mg/mL的對照品溶液。

2.2.3供試品液的制備取水提取液適量（相當于續(xù)斷藥材0.75g），置圓底燒瓶中，減壓濃縮至干，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲提取30min，放冷，用甲醇補足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.4標準曲線的制備精密吸取對照品溶液2、4、8、12、16、20μL，依次注入高效液相色譜儀，各重復3次，記錄峰面積。以川續(xù)斷皂苷VI峰面積均值（A）對進樣質(zhì)量濃度（ρ）進行線性回歸，得回歸方程為A=191595.75ρ97704.96，r=0.9998（n=6）。表明川續(xù)斷皂苷VI在3.09～30.9μg/mL之間與峰面積具有良好線性關(guān)系。

2.2.5樣品含量測定精密吸取供試品溶液及對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按“2.2.1”項下條件進行測定，測得的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品和樣品色譜圖見圖1。

2.2.6精密度試驗精密吸取同一對照品溶液10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，連續(xù)測定6次，結(jié)果RSD值為0.66%(n=6)，表明本法精密度良好。

2.2.7重復性試驗分別取同一批號樣品6份，按“2.2.3”項方法制備溶液，依法測定川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，結(jié)果測得含量的RSD值為0.92%(n=6),表明本法重復性良好。

2.2.8穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件，間隔不同時間進行測定，結(jié)果RSD值為0.50%(n=5)，表明供試品溶液在4h內(nèi)測定基本穩(wěn)定。

2.2.9加樣回收率試驗取已知含量的樣品，分別加入一定量的對照品，置圓底燒瓶中，按“2.2.3”項方法制備供試品溶液并在上述條件下測定，其平均回收率為100.30%，RSD為2.84%(n=6)。

2.3正交實驗結(jié)果

結(jié)果見表2、表3。表2正交試驗結(jié)果表3方差分析表從表2、表3中可見，因素A、因素C對實驗結(jié)果有顯著影響，因素B對實驗結(jié)果影響較小。綜合正交實驗結(jié)果及節(jié)約生產(chǎn)成本的角度考慮，確定最佳工藝為A3B2C2，即加10倍量水煎煮2次，每次1h。按最佳工藝對3批樣品進行驗證實驗，結(jié)果3批樣品的平均含量分別為11.57、12.19和12.02mg/粒，可見該工藝穩(wěn)定可行。

3討論

3.1有關(guān)續(xù)斷等藥材成分提取的研究報道很多，綜合文獻研究和預試驗，采用水煎煮方式進行提取，并以川續(xù)斷皂苷VI含量作為考察工藝的指標，采用L9（34）正交實驗表進行試驗，得出三仙壯骨膠囊的水提部位最佳工藝條件。該工藝簡便可行，有良好的可操作性。

3.2鑒于川續(xù)斷皂苷Ⅵ有防止骨質(zhì)疏松、增強骨密度的作用,與續(xù)斷的傳統(tǒng)功效吻合［5］,本文對提取液中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量進行了測定,其總量轉(zhuǎn)移率為90.03%。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2005版一部［M］.北京：化學工業(yè)出版社，2005:231.

［2］譚洪根，林生，張啟偉，等.高效液相色譜法測定續(xù)斷藥材中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量［J］.中國中藥雜志，2006，31（9）:726-727.

［3］馬新飛，陸兔林，毛春芹,等.HPLC法測定不同續(xù)斷炮制品中川續(xù)斷皂苷Ⅵ［J］.中草藥，2007，38（5）：707-708.

［4］王初.發(fā)汗與不發(fā)汗續(xù)斷中水溶性浸出物和川續(xù)斷皂苷VI的比較［J］.中草藥，2007，38（6）：865-866.

［5］王巖,周莉玲,李銳.川續(xù)斷的研究進展［J］.時珍國醫(yī)國藥，2004，4（13）：233-234.